染料法嗜血支原體通用實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒

Dye-quantitative Real-time PCR Kit for Universal Hemoplasma

貨號(hào)：Mqs-hae-20        規(guī)格：20個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqs-hae-50        規(guī)格：50個(gè)反應(yīng)

貨號(hào)：Mqs-hae-100         規(guī)格：100個(gè)反應(yīng)

  儲(chǔ)存：-20度，避光保存，保質(zhì)期一年。避免反復(fù)凍融。

試劑盒特點(diǎn)：

1，可作為嗜血支原體通用試劑盒使用，可檢測(cè)絕大部分目前已知的嗜血支原體。

2，使用熱啟動(dòng)的Taq酶，可抑制非特異性擴(kuò)增，降低背景熒光。

3，帶有陽(yáng)性對(duì)照樣品，可用于檢驗(yàn)試劑盒有效性，以及驗(yàn)證待測(cè)樣品中是否含有PCR抑制劑。

4，帶有ROX參比染料，幫助校正加樣誤差和管間差異。

5，帶有UDG酶和dUTP，可降低殘留DNA的污染。

6，本試劑盒靈敏度高，可檢出反應(yīng)液中最少達(dá)1-10個(gè)基因組。

嗜血支原體（Hemotropic mycoplasmas，或hemoplasmas）寄生于多種哺乳動(dòng)物血液中，附著于紅細(xì)胞表面，無(wú)細(xì)胞壁，具多形性，可通過(guò)血液傳播。嗜血支原體曾被命名為血巴爾通體/血巴通氏體（Haemobartonella）和 附紅細(xì)胞體（Eperythrozoon），分類為立克次氏體屬，現(xiàn)已重新歸類為支原體屬。臨床上嗜血支原體可引發(fā)溶血性貧血癥，其他癥狀還包括：厭食癥、昏睡癥、脫水、體重減輕、突然死亡等，有時(shí)表現(xiàn)為急性發(fā)作，也有很多動(dòng)物感染后癥狀輕微或無(wú)癥狀。不同種動(dòng)物感染的嗜血支原體有遺傳相似性，提示有跨物種傳播的可能性。目前已在貓、狗、豬、牛、羊、駝、鼠等動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)嗜血支原體，很多動(dòng)物的血液支原體感染仍為未知狀態(tài)。

嗜血支原體尚不能體外培養(yǎng)，一般采用PCR法在血液或組織樣本中檢測(cè)。常規(guī)PCR方法較為繁瑣，耗時(shí)較長(zhǎng)，較易產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增；探針?lè)▽?shí)時(shí)定量PCR具有更強(qiáng)的特異性，較少受到殘留DNA的污染，較難識(shí)別未知物種；SYBR法實(shí)時(shí)定量PCR可兼具二者的優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)熔解曲線來(lái)區(qū)分不同的PCR產(chǎn)物，提高檢測(cè)的特異性，相較探針?lè)?，又可在一定程度上識(shí)別未知物種。

染料法嗜血支原體通用實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒采用SYBR染料法，根據(jù)嗜血支原體的16S rRNA基因序列，設(shè)計(jì)通用引物，可識(shí)別寄生于常見(jiàn)哺乳動(dòng)物（如：貓、犬、豬、牛、羊、鼠等）的所有已知嗜血支原體。通過(guò)BLAST驗(yàn)證，本試劑盒與非嗜血支原體的其他物種無(wú)交叉反應(yīng)，個(gè)別物種可能產(chǎn)生的非特異信號(hào)可通過(guò)Tm值輕易排除。使用本試劑盒對(duì)320個(gè)貓血樣進(jìn)行檢測(cè)，獲得139個(gè)陽(yáng)性。對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，證實(shí)為嗜血支原體特異性擴(kuò)增，其中包括貓的全部三種嗜血支原體。

本試劑盒可識(shí)別的嗜血支原體包括：Mycoplasma haemofelis、Candidatus Mycoplasma haemominutum、Candidatus Mycoplasma turicensis、Mycoplasma haemocanis、Candidatus Mycoplasma haematoparvum、Mycoplasma suis、Mycoplasma wenyonii、Candidatus Mycoplasma haemobos、Mycoplasma ovis、Mycoplasma haemomuris、Mycoplasma coccoides、Candidatus Mycoplasma haemolamae、Mycoplasma erythrodidelphis、Candidatus Mycoplasma kahanei等。

下表列出已知的可識(shí)別嗜血支原體種類：

本試劑盒包含熱啟動(dòng)Taq酶、dNTP（以UTP代替了TTP）、引物、陽(yáng)性對(duì)照品、SYBR Green I染料、ROX染料，和用以防止殘余DNA污染的UDG（尿嘧啶-N-糖苷酶），用戶只需準(zhǔn)備好DNA樣品即可使用。

本產(chǎn)品僅供研究使用。

相關(guān)小知識(shí)：

熱啟動(dòng)Taq酶結(jié)合了特異性單克隆抗體的DNA聚合酶，在室溫下聚合酶活性被抗體抑制。在PCR循環(huán)的變性階段，抗體受熱被去除，聚合酶活性恢復(fù)，因此獲得“熱啟動(dòng)"功能，可減少殘余DNA的污染，提高PCR擴(kuò)增效率、靈敏度和目的片段產(chǎn)量。

SYBR Green I可以與DNA雙鏈的小溝結(jié)合，結(jié)合后在497nm激發(fā)光照射下產(chǎn)生520nm的發(fā)射光。未結(jié)合雙鏈DNA的SYBR Green I基本不產(chǎn)生熒光。因此可以根據(jù)熒光值的大小判斷溶液內(nèi)DNA雙鏈的多寡，用于實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)物的累積量。初始模板濃度越高，反應(yīng)循環(huán)數(shù)越高，則雙鏈DNA含量越高，熒光值也就越高。值得注意的是，SYBR Green I也可以結(jié)合非特異性PCR產(chǎn)物以及引物二聚體，此時(shí)產(chǎn)生的熒光與目標(biāo)擴(kuò)增產(chǎn)物無(wú)法區(qū)分。為了判斷熒光信號(hào)是否來(lái)自目標(biāo)擴(kuò)增產(chǎn)物，可以繪制熔解曲線。通過(guò)逐步緩慢升溫，使雙鏈DNA解離為單鏈DNA，同時(shí)檢測(cè)熒光值的變化，繪制曲線，根據(jù)熒光值觀察DNA解鏈的溫度。

UDG和dUTP可以阻止前次步驟殘余DNA的擴(kuò)增。dUTP可以確保擴(kuò)增后的DNA中均含有尿嘧啶。UDG可從單鏈或雙鏈DNA上去除尿嘧啶殘基，從而阻止含有尿嘧啶的DNA作為下幾輪PCR的模板。在PCR循環(huán)開(kāi)始前的UDG孵育步驟，可以破壞帶有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物。經(jīng)過(guò)該去除污染步驟后，UDG在正常的PCR循環(huán)過(guò)程中被高溫滅活，對(duì)PCR反應(yīng)沒(méi)有影響。

ROX不參與PCR反應(yīng)，在PCR反應(yīng)過(guò)程中熒光沒(méi)有變化，可以提供一條基線用于校正加樣誤差和管間差異，便于儀器自動(dòng)分析報(bào)告熒光與內(nèi)參ROX熒光的比值，使定量更準(zhǔn)確。ROX染料的激發(fā)波長(zhǎng)為584nm，發(fā)射波長(zhǎng)為612nm。用ROX進(jìn)行校正后可以使實(shí)驗(yàn)誤差減小十倍左右。

相關(guān)產(chǎn)品：

嗜血支原體通用PCR檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)：M-hemo-20，M-hemo-50，M-hemo-100

探針?lè)?/span>Candidatus Mycoplasma haemolamae實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqt-hla-20，Mqt-hla-50，Mqt-hla-100

豬支原體PCR檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)：M-suis-20，M-suis-50，M-suis-100

染料法豬支原體實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqs-sui-20，Mqs-sui-50，Mqs-sui-100

維容氏支原體PCR檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)：M-weny-20，M-weny-50，M-weny-100

探針?lè)ňS容氏支原體實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqt-wen-20，Mqt-wen-50，Mqt-wen-100

探針?lè)?span>Candidatus Mycoplasma haemobos實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqt-hbo-20，Mqt-hbo-50，Mqt-hbo-100

羊附紅細(xì)胞體PCR檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)：M-ovis-20，M-ovis-50，M-ovis-100

染料法羊支原體實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqs-ovi-20，Mqs-ovi-50，Mqs-ovi-100

貓血支原體PCR檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)：M-hfel-20，M-hfel-50，M-hfel-100

染料法貓血支原體實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqs-hfe-20，Mqs-hfe-50，Mqs-hfe-100

探針?lè)ㄘ堁гw實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqt-hfe-20，Mqt-hfe-50，Mqt-hfe-100

染料法Candidatus Mycoplasma turicensis實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqs-tur-20，Mqs-tur-50，Mqs-tur-100

探針?lè)?span>Candidatus Mycoplasma turicensis實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqt-tur-20，Mqt-tur-50，Mqt-tur-100

染料法Candidatus Mycoplasma haematoparvum實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqs-hpa-20，Mqs-hpa-50，Mqs-hpa-100

探針?lè)?span>Candidatus Mycoplasma haematoparvum實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqt-hpa-20，Mqt-hpa-50，Mqt-hpa-100

Candidatus Mycoplasma haemominutum PCR檢測(cè)試劑盒，貨號(hào)：M-hmin-20，M-hmin-50，M-hmin-100

染料法Candidatus Mycoplasma haemominutum實(shí)時(shí)定量PCR試劑盒，貨號(hào)：Mqs-hmi-20，Mqs-hmi-50，Mqs-hmi-100