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當(dāng)前位置:上海谷研實業(yè)有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>核酸擴增>> 2500U全血Taq DNA聚合酶

全血Taq DNA聚合酶

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具體成交價以合同協(xié)議為準

產(chǎn)品型號2500U

品       牌R&D/美國

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-04-22 14:56:40瀏覽次數(shù):438次

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供貨周期 現(xiàn)貨 貨號 GOY-F10308
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 僅供科研使用
全血Taq DNA聚合酶公司正*的各種產(chǎn)品細胞MEK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織MEK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞MKK6激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織MKK6激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞MSK1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)

下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研

中文名稱

英文名稱

產(chǎn)品規(guī)格

貨號

全血Taq DNA聚合酶

BloodTaq DNA   Polymerase

2500U

GOY-F10308

產(chǎn)品詳細介紹:

本品是通過缺失Taq DNA   Polymerase N端一段氨基酸和突變改造得到的新型DNA聚合酶。通過改造后使本產(chǎn)品能夠全血中存在的抑制劑產(chǎn)生耐受作用,能夠直接擴增人和小鼠全血樣品中的DNA而無需事先對基因組進行提取和純化。PCR產(chǎn)物3’端為A,可直接用于T/A克隆。

注意:

a.PCR儀于94-95℃預(yù)熱,將樣品放置于PCR儀上開始循環(huán)。

b.BloodTaq提高了冷敏感性,具備了一些熱啟動特性。通??梢酝ㄟ^在冰上配制反應(yīng)成分、后加入聚合酶以及將熱循環(huán)儀預(yù)熱至變性溫度(95)后立即進行反應(yīng)來避免非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。

c.變性溫度與時間:在PCR循環(huán)前為了充分裂解血液細胞和釋放/變性DNA,要求初始變性為95 5分鐘。

d.退火溫度與時間:退火時間通常為30-1分鐘。退火溫度可以低于理論退火溫度(Tm)5℃開始,通過梯度PCR進行優(yōu)化。

e.延伸時間:延伸反應(yīng)通常在72℃下進行。一般每250-500 bp延伸時間為1分鐘。推薦72 10分鐘進行終延伸。

f.通常35-40個循環(huán)可以達到優(yōu)擴增。

5、結(jié)果檢測:反應(yīng)結(jié)束后取5μl反應(yīng)產(chǎn)物并加上電泳緩沖液一起電泳檢測結(jié)果。

儲存條件:-20℃,避免反復(fù)凍融。

DNA提取流程圖:

QQ截圖20220414142532.png

實驗步驟
(1)
實驗開始前將RNA提取液于65水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL80ul,50mL中加入300ul)
(2)
取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65
水浴3-10 min,期間混勻2-3
(4)
加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(5)
取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(6)
加入1/4V體積10M LiCl溶液,4放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4
離心20min
(8)
棄上清,500ul SSTE溶解沉淀
(9)
::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1(10,000rpm,4,5min)
(10)
2V體積的無水乙,-70冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4
離心20 min
(12)
棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)
200ulDEPC處理水溶解
(14)
用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(
在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
操作步驟:
1.
勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅
b.
單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(3.5cm直徑的培養(yǎng)板)1ml,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNADNA污染。
c
.細胞懸液 離心收集細胞,每5-10×106動物、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2
.將勻漿樣品在室溫(15-30)放置5分鐘,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3
.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),脂肪,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-810000×g離心10分鐘,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,上層有大量油脂應(yīng)去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5.
每使用1ml TRIzol加入0.2ml,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘。
6. 2-8
10000×g離心15分鐘。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7.
把水相轉(zhuǎn)移到新管中,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,室溫放置10分鐘。
8. 2-8
10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清。
可溶性細胞表面分化抗原40配體   英文名稱:   Soluble Cluster of differeiation aigen 40 ligand   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   sCD40L  Dihydrosenkyunolide C  195142-72-4  中文名:二氫洋川芎內(nèi)酯C  分子式:C12H14O3 

可溶性髓系細胞觸發(fā)受體-1   英文名稱:   soluble iggering receptor expressed on myeloid cells-1   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   sEM-1  Pazufloxacin mesilate  中文名:甲磺酸帕珠  分子式:C17H19FN2O7S 

可溶性白細胞抗原G   英文名稱:   soluble leukocyte aigen G   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   sHLA-G  Norethindrone  中文名:炔諾酮  分子式:C20H26O2 

可溶性白細胞抗原 G5(sHLA-G5)   作用:   ELISA   規(guī)格:   48T/96T   進口分裝  Norfloxacin  70458-96-7  中文名:  分子式:C16H18FN3O3  度:98.0%  關(guān)鍵詞: 

可溶性白細胞抗原 G(sHLA-G)   作用:   ELISA   規(guī)格:   48T/96T   進口分裝  Norfloxacin  中文名:  分子式:C16H18FN3O3
S-2-
羥基戊二酸  (2S)-2-Hydroxyglutaric Acid   質(zhì)量規(guī)格:美國,95% 人酪羥化酶(TH)ELISA檢測試劑盒Humayrosinehydroxylase,THELISAKit 96T/48T

3-去氮腺嘌呤  3-Deazaneplanocin A HCl salt  質(zhì)量規(guī)格:美國,97% 大鼠細胞膜鈣轉(zhuǎn)運ATP1(ATP2B1)試劑盒 Rat Plasma membrane calcium-anspoing ATPase 1,ATP2B1 ELISA kit

4-氧代維甲酰酚胺  3-Keto Fenretinide   質(zhì)量規(guī)格:美國 英文名稱RatCardiolipinIgG(ACAIgG)ELISAKit大鼠心0脂抗體CardiolipinIgG(ACAIgG)規(guī)格:96T/48T

4-表米諾環(huán)素  4-Epi Minocycline  質(zhì)量規(guī)格:美國 果蠅直接法PCR擴增試劑盒50

?;敲撗跄懰徕c  Taurodeoxycholic acid  salt  質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR ELISAKitGP-Ⅳ人血小板膜糖蛋白Ⅳ規(guī)格:48T/96T

四環(huán)素(國產(chǎn))  Tetracycline  質(zhì)量規(guī)格:BR,國產(chǎn) 小鼠肌球蛋白重鏈4(MYH4)ELISA試劑盒 ,英文名: MYH4 ELISA Kit

乙基氫化銅蛋白,鹽酸奧普托欣  Ethylhydrocupreine HCl,Optochin HCl  質(zhì)量規(guī)格:>97%,美國進口 人葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA檢測試劑盒Humanglucoseoxidase,GODELISAKit 96T/48T

莫西菌素,莫西克汀  Moxidectin   質(zhì)量規(guī)格:>90%,BR 大鼠細胞角蛋白18-M65(CK 18-M65)試劑盒 Rat cytokeratin 18-M65,CK 18-M65 ELISA kit

莫西菌素,莫西克汀(標準品)  Moxidectin   質(zhì)量規(guī)格:含量測定,標準品 英文名稱RatCardiolipinIgA(ACAIgA))Elisakit大鼠心0脂抗體CardiolipinIgA(ACAIgA)規(guī)格:96T/48T

氨力農(nóng)  Amrinone  質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 過氧化氫處理DNA損傷彗星熒光檢測試劑盒20
全血Taq DNA聚合酶體液單胺氧化酶B型(MAOB)活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

組織單胺氧化酶B型(MAOB)活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

細胞單胺氧化酶B型(MAOB)活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

體液單胺氧化酶A型(MAOA)活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒

組織單胺氧化酶A型(MAOA)活性化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒


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