蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱：羧酸酯酶5A(CES5A)重組蛋白人

英文名稱：Recombinant Carboxylesterase 5A (CES5A)

CES7; CES4C1; CES5; CAUXIN; Carboxylesterase-like urinary excreted protein homolog

型號(hào)：GOY-01D32

酶與激酶

物種：Homo sapiens (Human，人)

來(lái)源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位：：分泌

預(yù)測(cè)分子量：51.7kDa

實(shí)際分子量：54kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書)

片段與標(biāo)簽：His383~Phe570 with N-terminal His and GST Tag

緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 90%

等電點(diǎn)：5.9

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

英文名稱：Recombinant Cathepsin K (CTSK)  產(chǎn)品名稱：組織K(CTSK)重組蛋白物種：Sus scrofa; Porcine (Pig，豬)

英文名稱：Recombinant Cathepsin K (CTSK)  產(chǎn)品名稱：組織K(CTSK)重組蛋白

英文名稱：Recombinant Cathepsin K (CTSK)  產(chǎn)品名稱：組織K(CTSK)重組蛋白物種：Oryctolagus cuniculus (Rabbit，兔)

英文名稱：Recombinant Cathepsin K (CTSK)  產(chǎn)品名稱：組織K(CTSK)重組蛋白物種：Rhesus monkey (Simian，恒河猴)

英文名稱：Recombinant Phospholipase C Gamma 1 (PLCg1)  產(chǎn)品名稱：磷酯酶Cγ1(PLCg1)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Glutamate Dehydrogenase 1 (GLUD1)  產(chǎn)品名稱：脫氫酶(GLUD1)重組蛋白物種：Bos taurus; Bovine (Cattle，牛)

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

β淀粉樣前體蛋白結(jié)合蛋白1抗體（X11α） APBA1

磷酸化非受體激酶c-Abl抗體 phospho-c-Abl (Tyr70)

載脂蛋白E抗體 Apolipoprotein E

甲胎蛋白AFP抗體 AFP

陰離子交換蛋白2抗體 AE2

鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體 Aconitase 1

三酶家族蛋白3A抗體 ATAD3A

載脂蛋白J抗體 APOJ

二核糖基轉(zhuǎn)移酶4抗體 ART4

AKIRIN2蛋白抗體 AKIRIN2

載脂蛋白H抗體 APOH

ADP核糖基化樣因子8B抗體 ARL8B

羧酸酯酶5A(CES5A)重組蛋白人東京根霉 Rhizopus tonkinensis蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis

大腸桿菌 Escherichia coli薛瓦酵母 Saccharomyces chevalieri

地衣芽孢桿菌 Bacillus licheniformis膠韌革菌 Gloeostereum incarnatum

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞（未分化）苜蓿中華根瘤菌

淺天藍(lán)鏈霉菌 Streptomyces coerulescens大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum

嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilusMRC5/成纖維細(xì)胞

SMC-1(人胸膜瘤細(xì)胞)酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis

NCI-H838(人非小細(xì)胞肺細(xì)胞)人皮膚肥大細(xì)胞培養(yǎng)基

苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti葡萄汁酵母 Saccharomyces uvarum

DLD-1(人結(jié)腸腺細(xì)胞)中華根霉

蘇云金芽孢桿菌 Bacillus thuringiensis泛酸枝芽胞桿菌 Virgibacillus pantothenticus

洛格酵母 Saccharomyces logos小鼠白血病細(xì)胞G-CSF依賴性

小鼠膀胱上皮細(xì)胞培養(yǎng)基透質(zhì)酸酶(含100mL酶解緩沖液)