蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中，通過瞬時表達產(chǎn)生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標蛋白及純化報告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag）或切除純化標簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達90%以上。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱：丙酮酸激酶同工酶R/L(PKLR)重組蛋白人

英文名稱：Recombinant Pyruvate kinase isozymes R/L (PKLR)

PK; PyK; PK1; PKL; Pyruvate Kinase Isozymes R/L; Glutamic--pyruvic transaminase 1; R-type/L-type pyruvate kinase; Red cell/liver pyruvate kinase

型號：GOY-01D131

酶與激酶

代謝通路

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位：：n/a

預(yù)測分子量：25.2kDa

實際分子量：28kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽：Ile219~Met420 (Accession # P30613) with

緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）

性狀：凍干粉

純度：> 95%

等電點：6.1

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

英文名稱：Recombinant Glutathione Peroxidase 3, Plasma (GPX3)  產(chǎn)品名稱：血漿過氧化物酶(GPX3)重組蛋白物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

英文名稱：Recombinant Glycyl tRNA Synthetase (GARS)  產(chǎn)品名稱：甘氨酰tRNA合成酶(GARS)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Arginyl tRNA Synthetase (RARS)  產(chǎn)品名稱：精氨酰tRNA合成酶(RARS)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Lysyl tRNA Synthetase (KARS)  產(chǎn)品名稱：賴tRNA合成酶(KARS)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Threonyl tRNA Synthetase (TARS)  產(chǎn)品名稱：蘇氨酰tRNA合成酶(TARS)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Neutral Sphingomyelinase (NSMASE)  產(chǎn)品名稱：中性鞘磷脂酶(NSMASE)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

9號染色體開放閱讀框64抗體 C9orf64

9號染色體開放閱讀框62抗體 C9orf62

9號染色體開放閱讀框66抗體 C9orf66

9號染色體開放閱讀框68抗體 C9orf68

9號染色體開放閱讀框7抗體 C9orf7

9號染色體開放閱讀框71抗體 C9orf71

K-酪蛋白抗體 Casein Kappa

20號染色體開放閱讀框26抗體 C20orf26

二硫鍵氧化還原酶鋅指蛋白5抗體 CXXC5

L-型電壓依賴型鈣通道β抗體 CACNB2

C2CD4D蛋白抗體 C2CD4D

過氧化氫酶抗體 Catalase

丙酮酸激酶同工酶R/L(PKLR)重組蛋白人葡糖桿菌屬 Gluconobacter sp.小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 Yersinia enterocolitica

根瘤菌QSG-7701(人正常肝細胞)

貓腎上皮細胞CA46(人Burkitts淋巴瘤細胞)

漢遜德巴利酵母 Enterobacter cloacea酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis

根瘤菌 Rhizobium sp.酒假絲酵母 Candida kefyr

大豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium japonicum金耳 Tremella aurantialba

肝細胞HBV病毒株枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis

毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipes異常漢遜酵母 Hansenula anomala

豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vignaBCIP/NBT KitBCIP/NBT堿性磷酸酶顯色試劑盒

屎腸球菌 Enterococcus faeciumGC-1, 鼠原細胞

苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

暗黑橄欖鏈霉菌 Streptomyces atroolivaceus釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

小鼠角膜內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基百脈根根瘤菌 Rhizobium loti