蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

英文名稱：Recombinant Glucokinase (GCK)

GK; GLK; HHF3; HK4; HKIV; HXKP; MODY2; Hexokinase-D; Hexokinase 4; Maturity Onset Diabetes Of The Young 2

型號(hào)：GOY-01D282

酶與激酶

代謝通路

內(nèi)分泌學(xué)

營養(yǎng)代謝

物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

來源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細(xì)胞定位：：細(xì)胞核, 細(xì)胞質(zhì)

預(yù)測分子量：54.1kDa

實(shí)際分子量：54kDa(差異分析請(qǐng)參閱說明書)

片段與標(biāo)簽：Asp194~Gly410 with N-terminal His and GST Tag

緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 90%

等電點(diǎn)：4.5

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

英文名稱：Recombinant Stearoyl Coenzyme A Desaturase (SCD)  產(chǎn)品名稱：硬脂酰去飽和酶(SCD)重組蛋白物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

英文名稱：Recombinant Stearoyl Coenzyme A Desaturase (SCD)  產(chǎn)品名稱：硬脂酰去飽和酶(SCD)重組蛋白物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

英文名稱：Recombinant Flavin Containing Monooxygenase 1 (FMO1)  產(chǎn)品名稱：含黃素單加氧酶1(FMO1)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Inosine 5'-Monophosphate Dehydrogenase 2 (IMPDH2)  產(chǎn)品名稱：-5'-單磷酸脫氫酶2(IMPDH2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Phosphodiesterase 1A, Calmodulin Dependent (PDE1A)  產(chǎn)品名稱：磷酸二酯酶1A(PDE1A)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Phosphodiesterase 1C, Calmodulin Dependent (PDE1C)  產(chǎn)品名稱：磷酸二酯酶1C(PDE1C)重組蛋白物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體 CNTF

柯薩奇病毒A16型聚合酶3D Cox A16 polymerase3D

細(xì)胞角蛋白16抗體 CK16

4號(hào)染色體開放閱讀框17抗體 C4orf17

細(xì)胞質(zhì)脆性X智力低下蛋白結(jié)合蛋白2抗體 CYFIP2

胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成素受體抗體 CRLF2

細(xì)胞角蛋白12抗體 CK12

半γ合成酶抗體 Ceramide glucosyltransferase

補(bǔ)體C2抗體 Complement C2

造血干細(xì)胞抗原CD133抗體 CD133

細(xì)胞表面趨化因子受體3抗體 CXCR3

內(nèi)毒素受體抗體 CD14

葡萄糖激酶(GCK)重組蛋白大鼠費(fèi)氏中華根瘤菌 Sinorhizobium frediiAsPC-1(人胰腺細(xì)胞)

桿菌屬 Lactobacillus sp.棒桿菌 Corynebacterium glutamicum

T/G HA－VSMC(人血管平滑肌細(xì)胞)小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞

球孢白僵菌 Beauveria bassianaNEC(人食管細(xì)胞)

IMR-32(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞)胰(含10mL 酶解緩沖液)

膠韌革菌植物桿菌 Lactobacillus plantarum

苜蓿中華根瘤菌宇佐美曲霉 Aspergillus usamii

毛柄金錢菌(金針菇) Flammulina velutipesMCF-7 [MCF7], 人腺細(xì)胞系

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae豇豆慢生根瘤菌 Bradyrhizobium vigna

人胚肺成纖維樣細(xì)胞人成骨肉瘤細(xì)胞

酸球菌脂亞種 Lactococcus lactis subsp. cremoris5637(人膀胱細(xì)胞)

保加利亞桿菌 Lactobacillus bulgaricus人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞

大豆慢生根瘤菌酸球菌亞種 Lactococcus lactis subsp. lactis