蛋白表達及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞，然后將重組質粒轉染到細胞中，通過瞬時表達產生目標蛋白。

2.收集含有目標蛋白的部分（細胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。

4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。

5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。

交付內容：純化好的目標蛋白及純化報告?？砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶撕灒?/span>Tag）或切除純化標簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達90%以上。

產品屬性：

英文名稱：Recombinant Glycogen Phosphorylase, Muscle (PYGM)

GPMM; Phosphorylase,Glycogen; McArdle Syndrome,Glycogen Storage Disease Type V; Myophosphorylase

型號：GOY-01D343

酶與激酶

代謝通路

內分泌學

物種：Homo sapiens (Human，人)

來源：原核表達

宿主E.coli

內毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位：：細胞質

預測分子量：21.7kDa

實際分子量：26kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽：Arg11~Gly187 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 97%

等電點：5.6

應用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關產品：

英文名稱：Recombinant NADH Dehydrogenase 1 (ND1)  產品名稱：NADH脫氫酶1(ND1)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Phosphodiesterase 5A, cGMP Specific (PDE5A)  產品名稱：磷酸二酯酶5A(PDE5A)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Matrix Metalloproteinase 23A (MMP23A)  產品名稱：基質金屬23A(MMP23A)重組蛋白物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)

英文名稱：Recombinant Transglutaminase 6 (TGM6)  產品名稱：轉酶6(TGM6)重組蛋白物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

英文名稱：Recombinant Pancreatic Lipase (PL)  產品名稱：胰脂肪酶(PL)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱：Recombinant Protein Kinase, cGMP Dependent Type II (PRKG2)  產品名稱：cGMP依賴性蛋白激酶Ⅱ(PRKG2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

操作步驟：

Ⅰ 實體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉移到1.5mL預冷的離心管，離心10000轉/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉移至新的預冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞，將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數分鐘待用。

4． 細胞洗滌后，轉至新的預冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復凍融。

公司正在出售的產品：

半胱胺酸蛋白-6抗體（C端） Caspase-6 (CT)

鈣調節(jié)蛋白-1抗體 Calponin 1

周期素A2抗體 Cyclin A2

鈣/鈣調素依賴蛋白激酶2α抗體 CaMK2 alpha

鈣/鈣調素依賴蛋白激酶2b/2γ抗體 CaMK2 beta gamma delta

細胞凋亡敏感性基因抗體 Exportin-2

天冬-特異性家族抗體 Caspase-1 P10

半胱胺酸-10抗體 Caspase-10

半胱胺酸蛋白-13抗體 Caspase-13 + 4

CD10抗體 CD10

半胱胺酸蛋白-12抗體 Caspase-12

CD105抗體 CD105

糖原磷酸化酶M(PYGM)重組蛋白人人氣管平滑肌細胞培養(yǎng)基紫紅曲霉 Monascus purpureus

百脈根根瘤菌 Rhizobium loti酸球菌脂亞種 Lactococcus lactis subsp. cremoris

植物桿菌 Lactobacillus plantarum酒假絲酵母 Candida kefyr

Ampicillin(100mg/ml,1000X)鬼傘屬 Bradyrhizobium vigna

桿菌 Lactobacillus sp.三葉草根瘤菌 Rhizobium trifolii

 正常細胞一步法Western專用封閉液

豹皮香菇 Lentinus lepideusP19(小鼠畸胎瘤細胞)

負鼠腎細胞香菇 Lentinula edodes

猴菌釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

小鼠神經干細胞（EGFP標記）凍膠假絲酵母 Candida gelida

人十二指腸腺細胞苜蓿中華根瘤菌 Sinorhizobium meliloti

粗狀假絲酵母 Candida valida不動桿菌 Acinetobacter sp.

臘狀芽胞桿菌 Bacillus cereusSaos-2(人骨肉瘤細胞)