蛋白表達(dá)及純化：

1.培養(yǎng)500ml哺乳動(dòng)物細(xì)胞，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，通過(guò)瞬時(shí)表達(dá)產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。

2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分（細(xì)胞或培養(yǎng)上清）。

3.通過(guò)親和，離子交換，疏水及凝膠過(guò)濾等多種層析方法純化表達(dá)的重組蛋白。

4.通過(guò)SDS-PAGE電泳檢測(cè)每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。

5.通過(guò)Western-blot驗(yàn)證目標(biāo)蛋白正確性。

交付內(nèi)容：純化好的目標(biāo)蛋白及純化報(bào)告。可按客戶(hù)要求提供含純化標(biāo)簽（Tag）或切除純化標(biāo)簽（Tag）的最終蛋白，純度最高可達(dá)90%以上。

產(chǎn)品屬性：

英文名稱(chēng)：Recombinant Acid Sphingomyelinase (ASM)

SMPD1; NPD; SMase; aSMase; Sphingomyelin Phosphodiesterase 1,Acid Lysosomal; Simply Sphingomyelinase

型號(hào)：GOY-01D450

酶與激酶

代謝通路

神經(jīng)科學(xué)

物種：Homo sapiens (Human，人)

來(lái)源：原核表達(dá)

宿主E.coli

內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)

亞細(xì)胞定位：：溶酶體

預(yù)測(cè)分子量：33.8kDa

實(shí)際分子量：30kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū))

片段與標(biāo)簽：His319~Pro579 with N-terminal His Tag

緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）

性狀：凍干粉

純度：> 95%

等電點(diǎn)：6.6

應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

以下是相關(guān)產(chǎn)品：

英文名稱(chēng)：Recombinant Fucosyltransferase 1 (FUT1)  產(chǎn)品名稱(chēng)：巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶1(FUT1)重組蛋白物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

英文名稱(chēng)：Recombinant Polyamine Oxidase (PAOX)  產(chǎn)品名稱(chēng)：多胺氧化酶(PAOX)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱(chēng)：Recombinant Beta-1,3-Glucuronyltransferase 3 (b3GAT3)  產(chǎn)品名稱(chēng)：β-1,3-葡糖醛酸基移酶3(b3GAT3)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱(chēng)：Recombinant Leucyl tRNA Synthetase (LARS)  產(chǎn)品名稱(chēng)：亮氨酰tRNA合成酶(LARS)重組蛋白物種：Mus musculus (Mouse，小鼠)

英文名稱(chēng)：Recombinant Carbohydrate Synthase 3 (CHSY3)  產(chǎn)品名稱(chēng)：糖合酶3(CHSY3)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

英文名稱(chēng)：Recombinant Microtubule Associated Monoxygenase, Calponin And LIM Domain Containing Protein 2 (MICAL2)  產(chǎn)品名稱(chēng)：含微管關(guān)聯(lián)單氧化酶調(diào)寧蛋白LIM域蛋白2(MICAL2)重組蛋白物種：Homo sapiens (Human，人)

操作步驟：

Ⅰ 實(shí)體組織蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑， 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

2．  每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小塊，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃勻漿器上下手動(dòng)勻漿15次，注意低溫操作；

3． 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管，離心10000轉(zhuǎn)/分，4℃離心5 min；

4． 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中，即為全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

Ⅱ 培養(yǎng)細(xì)胞蛋白提取

1． 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，吸去培養(yǎng)基后，加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次，每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液；

2． 懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞或用細(xì)胞刮子刮下的貼壁細(xì)胞，將細(xì)胞及培養(yǎng)液移至離心管中， 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min，再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS，1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑， 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF，混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。

4． 細(xì)胞洗滌后，轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃搖床平臺(tái)上，溫和振蕩15 min；

6． 14,000rpm，4℃離心15min，取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。

公司正在出售的產(chǎn)品：

抗表皮生長(zhǎng)因子抗體 EGF

小鼠抗表皮生長(zhǎng)因子抗體 EGF

內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白激酶A2+A3+A4抗體 Eph receptor A2+A3+A4

磷酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白激酶A2+A3+A4抗體 phospho-Eph receptor A2+A3+A4 (Tyr588 + Tyr596)

磷酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白激酶A3+A4+A5抗體 phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779)

轉(zhuǎn)錄因子Ets差異基因5抗體 Etv5

E選擇素抗體 E-Selectin

大腸桿菌耐熱性腸毒素抗體 heatstable enterotoxin 1 [Escherichia coli]

表皮生長(zhǎng)因子受體抗體 EGFR

Ets轉(zhuǎn)錄因子家族e(cuò)ts1抗體 ETS1

泛素激活酶E1抗體 E1 Ubiquitin Activating Enzyme

早期B淋巴細(xì)胞因子1抗體 EBF1

酸性神經(jīng)鞘磷脂酶(ASM)重組蛋白人基質(zhì)重塑關(guān)聯(lián)蛋白5(MXRA5)重組蛋白英文名稱(chēng)：Recombinant Matrix Remodelling Associated Protein 5 (MXRA5)

茜素-β-半糖苷/Aliz-Gal Agar用于食品、飲料和飲用水中大腸菌群快速檢測(cè)和計(jì)數(shù)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

鈣非依賴(lài)性磷脂酶A2(iPLA2)重組蛋白英文名稱(chēng)：Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

細(xì)菌總數(shù)顯色培養(yǎng)基/Total Genes Chromogenic Medium檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)，培養(yǎng)24小時(shí)，細(xì)菌顯紅色250毫升國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

BRL-3A(大鼠正常肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

Campy-Cefex添加劑/Campy-Cefex Supplement添加于200ml CAMPY-CEFEX基礎(chǔ)中2毫升×10支國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

小鼠腸平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

PC-3M(人前列腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

大鼠卵巢上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

RM-1(小鼠前列腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

碳酸酐酶Ⅱ(CA2)天然蛋白 英文名稱(chēng)：Native Carbonic Anhydrase II (CA2)