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所 在 地上海市
更新時間:2023-03-08 11:48:42瀏覽次數(shù):183次
聯(lián)系我時,請告知來自 化工儀器網(wǎng)供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 10μg50μg200μg1mg5mg |
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貨號 | GOY-01D537 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
主要用途 | 僅供科研實驗 | 英文名稱 | Recombinant Insulin Degrading Enzyme (IDE) |
物種 | Homo sapiens (Human,人) |
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 物種 | 貨號 |
胰島素降解酶(IDE)重組蛋白人 | Homo sapiens (Human,人) | GOY-01D537 |
英文名稱:Recombinant Insulin Degrading Enzyme (IDE)
Insulysin; Insulin Protease; Abeta-degrading protease; Insulinase
型號:GOY-01D537
酶與激酶
代謝通路
內(nèi)分泌學(xué)
心腦血管
物種:Homo sapiens (Human,人)
來源:原核表達
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細胞定位::細胞核, 分泌, 細胞質(zhì)
預(yù)測分子量:29.7kDa
實際分子量:30kDa(差異分析請參閱說明書)
片段與標(biāo)簽:Ala753~Pro973 with N-terminal His Tag
緩沖液成份:20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液(pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300)
性狀:凍干粉
純度:> 90%
等電點:7.2
應(yīng)用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg
蛋白表達及純化:
1.培養(yǎng)500ml哺乳動物細胞,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到細胞中,通過瞬時表達產(chǎn)生目標(biāo)蛋白。
2.收集含有目標(biāo)蛋白的部分(細胞或培養(yǎng)上清)。
3.通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結(jié)果并控制最終產(chǎn)品質(zhì)量。
5.通過Western-blot驗證目標(biāo)蛋白正確性。
交付內(nèi)容:純化好的目標(biāo)蛋白及純化報告??砂纯蛻粢筇峁┖兓瘶?biāo)簽(Tag)或切除純化標(biāo)簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達90%以上。
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二級目錄:活性蛋白/AP
英文名稱:Active Matrix Metalloproteinase 2 (MMP2) 產(chǎn)品名稱:基質(zhì)金屬2(MMP2)活性蛋白物種:Homo sapiens (Human,人)
英文名稱:Active Lemur Tyrosine Kinase 3 (LMTK3) 產(chǎn)品名稱:Lemur激酶3(LMTK3)活性蛋白物種:Homo sapiens (Human,人)
英文名稱:Active Granzyme A (GZMA) 產(chǎn)品名稱:顆粒酶A(GZMA)活性蛋白物種:Homo sapiens (Human,人)
英文名稱:Active Aspartate Aminotransferase (AST) 產(chǎn)品名稱:天冬轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性蛋白物種:Homo sapiens (Human,人)
英文名稱:Active Kallikrein 9 (KLK9) 產(chǎn)品名稱:激9(KLK9)活性蛋白物種:Mus musculus (Mouse,小鼠)
操作步驟:
Ⅰ 實體組織蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制劑, 1 μL蛋白酶抑制劑和 5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
2. 每100mg固體組織置于培養(yǎng)皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小塊,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃勻漿器上下手動勻漿15次,注意低溫操作;
3. 取組織勻漿液轉(zhuǎn)移到1.5mL預(yù)冷的離心管,離心10000轉(zhuǎn)/分,4℃離心5 min;
4. 取上清轉(zhuǎn)移至新的預(yù)冷的離心管中,即為全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
Ⅱ 培養(yǎng)細胞蛋白提取
1. 貼壁培養(yǎng)的細胞,吸去培養(yǎng)基后,加入10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS洗兩次,每次振搖數(shù)次以盡量去除培養(yǎng)液;
2. 懸浮培養(yǎng)的細胞或用細胞刮子刮下的貼壁細胞,將細胞及培養(yǎng)液移至離心管中, 1000轉(zhuǎn)/分離心10 min,再用10mL/150mm培養(yǎng)板的冷PBS,1000轉(zhuǎn)/分離心5 min洗兩次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制劑, 1μL蛋白酶抑制劑和5μL 100mM PMSF,混勻。冰上保存數(shù)分鐘待用。
4. 細胞洗滌后,轉(zhuǎn)至新的預(yù)冷的離心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
細胞數(shù)量 | Lysis Buffer加入量 |
107個 | 0.5 mL~1 mL |
5×106個 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃搖床平臺上,溫和振蕩15 min;
6. 14,000rpm,4℃離心15min,取上清為全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分裝保存于-70℃,避免反復(fù)凍融。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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受體4抗體 GLUR4
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Hoagland Nitrogen-free MediumBR20升國產(chǎn)/進口
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小鼠腮腺細胞培養(yǎng)基100mL
MuM-2B(人眼脈絡(luò)黑色素瘤細胞)5×106cells/瓶×2
孢磺啶(MUGal肉湯凍干配套試劑) 規(guī)格: 0.5mg/支x10 用途: 每支添加于100ml(022051)中配成MUGal肉湯。
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