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怎么處理細(xì)胞培養(yǎng)板里面的細(xì)胞總是聚集在周邊的問題

閱讀:3839      發(fā)布時間:2022-1-25
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  細(xì)胞培養(yǎng)板根據(jù)底部形狀的不同可分為平底和圓底(U型和V 細(xì)胞培養(yǎng)板型)
  平底的什么類型的細(xì)胞都可用﹐但當(dāng)細(xì)胞數(shù)目較少﹐如做克隆時﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等實驗時﹐無論貼壁 和懸浮細(xì)胞﹐一般均用平底板。至于U或V型板﹐一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學(xué)方面﹐當(dāng)做兩種不同淋巴細(xì)胞溷合培養(yǎng)時﹐需要二者相互接觸以刺激﹐ 因此﹐一般需要U型板﹐因細(xì)胞會由于重力的作用而聚集在一個很小的范圍內(nèi)。
  圓底培養(yǎng)板主要用于同位素?fù)饺氲膶嶒灒枰眉?xì)胞收集儀收集細(xì)胞的培養(yǎng)。
  細(xì)胞接種培養(yǎng)板,細(xì)胞總是聚集在周邊部分,該如何處理啊?
  先看下自己的細(xì)胞是如何混勻的?是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板?如果是后者,而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話,很有可能由于離心力的作用使細(xì)胞甩到周邊部分,導(dǎo)致細(xì)胞中間少,四周多!
  這里提供一個好辦法:在培養(yǎng)種板之前,把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里進(jìn)行幾個小時的飽和后再取出,種入細(xì)胞時力量要輕,可采取用滴頭在培養(yǎng)板孔的側(cè)面慢慢加入讓細(xì)胞懸液流入板孔中,培養(yǎng)的細(xì)胞基本是均勻生長。記住千萬不要用振蕩器振蕩,否則你的細(xì)胞就會想你說得那樣聚積在一起。
  培養(yǎng)板孔直徑愈小,這個現(xiàn)象越明顯,24、96孔板這種現(xiàn)象不可避免,因為液體的附壁使得孔內(nèi)培養(yǎng)液不是成一個液平面,而是周邊高,就像凹鏡一樣,而使用這兩種孔板由于需要加干預(yù)等原因而不能加足量培養(yǎng)液,使得細(xì)胞隨培養(yǎng)液一起出現(xiàn)“邊集”現(xiàn)象,如果為了使孔中央也有均勻細(xì)胞而增加接種細(xì)胞數(shù)量的話,這要看你需要觀察何種指標(biāo),如果是MTT ,免疫組化的話會因為細(xì)胞成層而影響結(jié)果。
  消化細(xì)胞時要注意吹打均勻,避免細(xì)胞成團(tuán),而且孔內(nèi)培養(yǎng)液量要足夠,一般接種時加足量培養(yǎng)液,加干預(yù)時換一次液,干預(yù)液加培養(yǎng)液量等于接種時培養(yǎng)液量,這樣的話“邊集”現(xiàn)象會有所改觀,不妨一試。

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