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THP-1細(xì)胞培養(yǎng)攻略

閱讀:2059      發(fā)布時(shí)間:2023-4-28
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THP-1 為啥養(yǎng)著貼壁了?

THP-1 養(yǎng)貼壁了還能拯救嗎?

THP-1細(xì)胞很多貼壁的怎么處理???

THP-1復(fù)蘇后,養(yǎng)不起來(lái)咋辦?

THP-1聚團(tuán)正常嗎?

THP-1已經(jīng)養(yǎng)了一周了,還是大量聚團(tuán),數(shù)量還是沒(méi)那么多,能擴(kuò)瓶嗎?

最近好多小伙伴咨詢(xún) THP-1 細(xì)胞培養(yǎng)各種難題,問(wèn)的最多的還是貼壁問(wèn)題。通過(guò)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)和資料查詢(xún),今天給大家出一份培養(yǎng)攻略,希望幫到大家。

先做一個(gè)簡(jiǎn)短介紹:THP-1 細(xì)胞系最初來(lái)自一位急性單核細(xì)胞白血病患者的血液,屬于懸浮細(xì)胞,有分化為多種巨噬細(xì)胞的能力,是各領(lǐng)域研究常用的細(xì)胞系之一。

 

表1 THP-1(人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞)細(xì)胞基本信息

形態(tài)

淋巴細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性

懸浮

營(yíng)養(yǎng)體系

89% RPMI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基(abs9484)+10% 胎牛血清優(yōu)級(jí)(abs972)+ 1%雙抗(abs9244)+0.1% mM 2- mercaptoethanol(abs9592)

 



圖1 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基(abs9484)和胎牛血清(特級(jí))(abs972)


圖2 THP-1(人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞)

 

THP-1單核細(xì)胞正常形態(tài)為懸浮的體積較小、透亮的圓形細(xì)胞,少數(shù)聚團(tuán)成葡萄狀,粒粒飽滿,輪廓清晰(如圖3)。該細(xì)胞在偏酸性環(huán)境中,生長(zhǎng)更快,所以當(dāng)培養(yǎng)基稍微變黃(呈橘紅色)時(shí),是比較適合細(xì)胞生長(zhǎng)的,此時(shí)補(bǔ)液或半換液即可;開(kāi)啟后的1640培養(yǎng)基,長(zhǎng)期放置pH會(huì)偏高,建議開(kāi)封后一周內(nèi)使用完畢。該細(xì)胞對(duì)血清要求高,血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化,建議選用高質(zhì)量的胎牛血清


圖3 狀態(tài)良好的THP-1(人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞)

 

首先,我們要討論的是THP-1貼壁問(wèn)題。THP-1細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況(如圖4),不需要擔(dān)心??梢暂p吹收集細(xì)胞或者丟棄貼壁部分細(xì)胞。但如果當(dāng)貼壁細(xì)胞比例高于20%,說(shuō)明細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境有異常,這時(shí)候就需要排查培養(yǎng)箱溫度及CO2濃度、培養(yǎng)基成分,以及培養(yǎng)器皿是否異常??捎梅荰C處理過(guò)的培養(yǎng)瓶,不利于細(xì)胞貼壁。

 

圖4 部分貼壁的THP-1(人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞)

 

然后我們要討論的是THP-1聚團(tuán)問(wèn)題(如圖5所示)。THP-1細(xì)胞在密度較稀時(shí),有少量細(xì)胞聚團(tuán)屬于正常現(xiàn)象,不建議將聚團(tuán)的細(xì)胞吹散,等待密度高時(shí),細(xì)胞會(huì)自然分散開(kāi)。當(dāng)細(xì)胞密度高時(shí),聚團(tuán)細(xì)胞比例高于30%時(shí),并且細(xì)胞團(tuán)呈糜爛狀,細(xì)胞之間界限不清,胞體質(zhì)膜有潰爛感,這種情況下的細(xì)胞聚團(tuán)是異常的。若對(duì)細(xì)胞沒(méi)有做過(guò)任何實(shí)驗(yàn)處理,可優(yōu)先排查營(yíng)養(yǎng)體系,比如更換血清品牌或增大血清比例(不超過(guò)20%)有助于解決聚團(tuán)問(wèn)題。


圖5 嚴(yán)重聚團(tuán)的THP-1(人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞)

 

最后我們要討論的是關(guān)于THP-1復(fù)蘇不起來(lái)怎么辦?(如圖6所示)該細(xì)胞對(duì)凍存密度有依賴(lài),凍存密度建議5*106-107/ml;同時(shí)復(fù)蘇密度也有依賴(lài)性,建議不低于3*106/ml。當(dāng)細(xì)胞傳過(guò)幾次代,狀態(tài)較好時(shí),傳代密度維持在5*105/ml-106/ml為宜,過(guò)2*106/ml則需要傳代。如有細(xì)胞碎片,待細(xì)胞密度增大后通過(guò)低速離心去除。


圖6 復(fù)蘇狀態(tài)很差的THP-1(人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞)

 

本期講解就到這里了,如有細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題,歡迎掃碼加入我們微信群交流。

注:圖源網(wǎng)絡(luò)和客戶(hù),僅供參考學(xué)習(xí)用

 



表2 細(xì)胞培養(yǎng)類(lèi)產(chǎn)品推薦

貨號(hào)

品名

規(guī)格

abs981

胎牛血清(特級(jí))

500ml

abs972

胎牛血清(優(yōu)級(jí))

500ml

abs974

胎牛血清(標(biāo)準(zhǔn)級(jí))

500ml

abs9483

高糖DMEM培養(yǎng)基

500ml

abs9484

RPMI-1640培養(yǎng)基

500ml

abs9505

MEM培養(yǎng)基

500ml

abs9506

α-MEM培養(yǎng)基

500ml

abs9554

Ham's F-12培養(yǎng)基

500ml

abs9563

Ham's F-12K培養(yǎng)基

500ml

abs9561

DMEM/F-12培養(yǎng)基

500ml

abs962

PBS緩沖液

500ml

abs970

D-PBS緩沖液(不含 Ca2+ Mg2+

500ml

abs971

D-PBS緩沖液(含 Ca2+ Mg2+)

500ml

abs9257

Hanks平衡鹽溶液(不含 Ca2+ Mg2+)

500ml

abs9258

Hanks平衡鹽溶液(含 Ca2+ Mg2+)

500ml

abs47014938

胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%) ,含酚紅

100ml

abs47047375

胰蛋白酶-EDTA消化液(0.25%),不含酚紅

100mL

abs9479

無(wú)DMSO無(wú)血清細(xì)胞凍存液

100mL

abs9417

無(wú)血清細(xì)胞凍存液

100mL

abs9473

細(xì)胞凍存液(含血清)

100mL

abs9474

組織保存液

100ml

abs9480

組織凍存試劑盒

30ml

abs9486

模具

1個(gè)/套

abs9487

小刀

5片/包

abs9481

組織復(fù)蘇試劑盒

50ml

abs42020125

卡那霉素B硫酸鹽

250mg

abs42018967

硫酸慶大霉素溶液

10ml

abs9244

青鏈雙抗

100ml

abs9245

青霉素-鏈霉素-慶大霉素混合溶液

100ml

abs42013298

兩性霉素B

1g

abs44071148

制霉菌素

1g

abs9246

青霉素-鏈霉素-兩性霉素B混合溶液

100ml

abs9252

支原體檢測(cè)試劑盒

100T

abs9375

支原體清除試劑

200uL×5

abs9376

支原體預(yù)防

500uL×4

abs816578

環(huán)丙沙星鹽酸鹽

500mg

abs9374

水盤(pán)抑菌劑

20ml

abs9371

水浴鍋抑菌劑

100ml

abs9372

培養(yǎng)箱除菌劑

480ml

abs9373

細(xì)胞房除菌劑

480ml




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