THP-1 為啥養(yǎng)著貼壁了?
THP-1 養(yǎng)貼壁了還能拯救嗎?
THP-1細(xì)胞很多貼壁的怎么處理??？
THP-1復(fù)蘇后，養(yǎng)不起來(lái)咋辦？
THP-1聚團(tuán)正常嗎？
THP-1已經(jīng)養(yǎng)了一周了，還是大量聚團(tuán)，數(shù)量還是沒(méi)那么多，能擴(kuò)瓶嗎？
最近好多小伙伴咨詢(xún) THP-1 細(xì)胞培養(yǎng)各種難題，問(wèn)的最多的還是貼壁問(wèn)題。通過(guò)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)和資料查詢(xún)，今天給大家出一份培養(yǎng)攻略，希望幫到大家。
先做一個(gè)簡(jiǎn)短介紹：THP-1 細(xì)胞系最初來(lái)自一位急性單核細(xì)胞白血病患者的血液，屬于懸浮細(xì)胞，有分化為多種巨噬細(xì)胞的能力，是各領(lǐng)域研究常用的細(xì)胞系之一。
表1 THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）細(xì)胞基本信息
形態(tài) | 淋巴細(xì)胞樣 |
生長(zhǎng)特性 | 懸浮 |
營(yíng)養(yǎng)體系 | 89% RPMI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基（abs9484）+10% 胎牛血清優(yōu)級(jí)（abs972）+ 1%雙抗（abs9244）+0.1% mM 2- mercaptoethanol（abs9592） |
圖1 1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基(abs9484)和胎牛血清(特級(jí))(abs972)
圖2 THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）
THP-1單核細(xì)胞正常形態(tài)為懸浮的體積較小、透亮的圓形細(xì)胞，少數(shù)聚團(tuán)成葡萄狀，粒粒飽滿，輪廓清晰（如圖3）。該細(xì)胞在偏酸性環(huán)境中，生長(zhǎng)更快，所以當(dāng)培養(yǎng)基稍微變黃（呈橘紅色）時(shí)，是比較適合細(xì)胞生長(zhǎng)的，此時(shí)補(bǔ)液或半換液即可；開(kāi)啟后的1640培養(yǎng)基，長(zhǎng)期放置pH會(huì)偏高，建議開(kāi)封后一周內(nèi)使用完畢。該細(xì)胞對(duì)血清要求高，血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。
圖3 狀態(tài)良好的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）
首先，我們要討論的是THP-1貼壁問(wèn)題。THP-1細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況（如圖4），不需要擔(dān)心?？梢暂p吹收集細(xì)胞或者丟棄貼壁部分細(xì)胞。但如果當(dāng)貼壁細(xì)胞比例高于20%，說(shuō)明細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境有異常，這時(shí)候就需要排查培養(yǎng)箱溫度及CO2濃度、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常?？捎梅荰C處理過(guò)的培養(yǎng)瓶，不利于細(xì)胞貼壁。
圖4 部分貼壁的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）
然后我們要討論的是THP-1聚團(tuán)問(wèn)題（如圖5所示）。THP-1細(xì)胞在密度較稀時(shí)，有少量細(xì)胞聚團(tuán)屬于正常現(xiàn)象，不建議將聚團(tuán)的細(xì)胞吹散，等待密度高時(shí)，細(xì)胞會(huì)自然分散開(kāi)。當(dāng)細(xì)胞密度高時(shí)，聚團(tuán)細(xì)胞比例高于30%時(shí)，并且細(xì)胞團(tuán)呈糜爛狀，細(xì)胞之間界限不清，胞體質(zhì)膜有潰爛感，這種情況下的細(xì)胞聚團(tuán)是異常的。若對(duì)細(xì)胞沒(méi)有做過(guò)任何實(shí)驗(yàn)處理，可優(yōu)先排查營(yíng)養(yǎng)體系，比如更換血清品牌或增大血清比例（不超過(guò)20%）有助于解決聚團(tuán)問(wèn)題。
圖5 嚴(yán)重聚團(tuán)的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）
最后我們要討論的是關(guān)于THP-1復(fù)蘇不起來(lái)怎么辦？（如圖6所示）該細(xì)胞對(duì)凍存密度有依賴(lài)，凍存密度建議5*106-107/ml；同時(shí)復(fù)蘇密度也有依賴(lài)性，建議不低于3*106/ml。當(dāng)細(xì)胞傳過(guò)幾次代，狀態(tài)較好時(shí)，傳代密度維持在5*105/ml-106/ml為宜，超過(guò)2*106/ml則需要傳代。如有細(xì)胞碎片，待細(xì)胞密度增大后通過(guò)低速離心去除。
圖6 復(fù)蘇狀態(tài)很差的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）
本期講解就到這里了，如有細(xì)胞培養(yǎng)問(wèn)題，歡迎掃碼加入我們微信群交流。
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表2 細(xì)胞培養(yǎng)類(lèi)產(chǎn)品推薦
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 |
abs981 | 胎牛血清（特級(jí)） | 500ml |
abs972 | 胎牛血清（優(yōu)級(jí)） | 500ml |
abs974 | 胎牛血清（標(biāo)準(zhǔn)級(jí)） | 500ml |
abs9483 | 高糖DMEM培養(yǎng)基 | 500ml |
abs9484 | RPMI-1640培養(yǎng)基 | 500ml |
abs9505 | MEM培養(yǎng)基 | 500ml |
abs9506 | α-MEM培養(yǎng)基 | 500ml |
abs9554 | Ham's F-12培養(yǎng)基 | 500ml |
abs9563 | Ham's F-12K培養(yǎng)基 | 500ml |
abs9561 | DMEM/F-12培養(yǎng)基 | 500ml |
abs962 | PBS緩沖液 | 500ml |
abs970 | D-PBS緩沖液（不含 Ca2+ Mg2+） | 500ml |
abs971 | D-PBS緩沖液（含 Ca2+ Mg2+) | 500ml |
abs9257 | Hanks平衡鹽溶液（不含 Ca2+ Mg2+) | 500ml |
abs9258 | Hanks平衡鹽溶液（含 Ca2+ Mg2+) | 500ml |
abs47014938 | 胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%） ，含酚紅 | 100ml |
abs47047375 | 胰蛋白酶-EDTA消化液（0.25%），不含酚紅 | 100mL |
abs9479 | 無(wú)DMSO無(wú)血清細(xì)胞凍存液 | 100mL |
abs9417 | 無(wú)血清細(xì)胞凍存液 | 100mL |
abs9473 | 細(xì)胞凍存液（含血清） | 100mL |
abs9474 | 組織保存液 | 100ml |
abs9480 | 組織凍存試劑盒 | 30ml |
abs9486 | 模具 | 1個(gè)/套 |
abs9487 | 小刀 | 5片/包 |
abs9481 | 組織復(fù)蘇試劑盒 | 50ml |
abs42020125 | 卡那霉素B硫酸鹽 | 250mg |
abs42018967 | 硫酸慶大霉素溶液 | 10ml |
abs9244 | 青鏈雙抗 | 100ml |
abs9245 | 青霉素-鏈霉素-慶大霉素混合溶液 | 100ml |
abs42013298 | 兩性霉素B | 1g |
abs44071148 | 制霉菌素 | 1g |
abs9246 | 青霉素-鏈霉素-兩性霉素B混合溶液 | 100ml |
abs9252 | 支原體檢測(cè)試劑盒 | 100T |
abs9375 | 支原體清除試劑 | 200uL×5 |
abs9376 | 支原體預(yù)防 | 500uL×4 |
abs816578 | 環(huán)丙沙星鹽酸鹽 | 500mg |
abs9374 | 水盤(pán)抑菌劑 | 20ml |
abs9371 | 水浴鍋抑菌劑 | 100ml |
abs9372 | 培養(yǎng)箱除菌劑 | 480ml |
abs9373 | 細(xì)胞房除菌劑 | 480ml |
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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