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目錄:愛必信(上海)生物科技有限公司>>分子生物學>>分子克隆>> abs60226快速內(nèi)切酶NotI

快速內(nèi)切酶NotI
  • 快速內(nèi)切酶NotI
參考價 200
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準
200
≥1
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 absin
  • 型號 abs60226
  • 廠商性質 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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>

更新時間:2025-02-08 13:44:14瀏覽次數(shù):2571評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T
貨號 abs60226 應用領域 化工,生物產(chǎn)業(yè),能源
快速內(nèi)切酶XbaI是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的限制性內(nèi)切酶,適用于質粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。
產(chǎn)品描述
描述
愛必信的快速內(nèi)切酶是一系列經(jīng)過基因工程重組、能夠在5~15分鐘內(nèi)精確完成DNA切割的限制性內(nèi)切酶,適用于質粒DNA、PCR產(chǎn)物或基因組DNA等的快速酶切。愛必信的快速內(nèi)切酶具有如下特點:5~15分鐘內(nèi)即可完成酶切;共用一種酶切Buffer,大大簡化酶切反應體系;良好的酶活冗余度,輕松應對底物過量或困難模板酶切。此外,愛必信生物去磷酸化、連接試劑在配套的Buffer中具有100%活性,支持一管化反應,提升“酶切-修飾-連接"的體驗。
識別位點:
5'...G C ↓ G G C C G C...3'
3'...C G C C G G ↑ C G...5'
同裂酶:CciNI
注:同裂酶對于不同的甲基化修飾也許具有不同敏感性。

快速內(nèi)切酶XbaI產(chǎn)品組分:

名稱規(guī)格
NotI50 μl
10× Cut Buffer1 ml
10× Cut Color Buffer1 ml
使用方法

1. 快速內(nèi)切酶XbaI DNA 快速酶切流程:
① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系:


質粒 DNAPCR 產(chǎn)物基因組 DNA
ddH2O15 μl16 μl30 μl
10× Cut  Buffer 或 10× Cut  Color Buffer2 μl3 μl(a)5 μl
底物 DNA2 μl (up to 1 μg)10 μl (~0.2 μg)10 μl (5 μg)
NotI1 μl1 μl5 μl
Total20 μl30 μl50 μl
a. 本體系適用于經(jīng)過純化的 PCR 產(chǎn)物酶切。未純化的 PCR 產(chǎn)物具備一定的離子強度,10× Cut Buffer 加入量可適當減少至 2 μl。但由于 DNA 聚合酶同時具有外切酶活性,會影響酶切產(chǎn)物,因此如下一步需進行克隆等操作,建議酶切前對 PCR 產(chǎn)物進行純化。
② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻(切勿渦旋),然后瞬時離心以收集掛壁液滴;
③ 37℃溫育 15 min(質粒),或 15~30 min(PCR 產(chǎn)物),或 30~60 min(基因組 DNA);
④ 80℃溫育 20 min 即可使酶失活,停止反應(可選)。
2. 雙酶切或多酶切:
① 每種快速內(nèi)切酶的用量為 1 μl,并根據(jù)需要適當擴大反應體系;
② 所有快速內(nèi)切酶的體積總和不得超過總反應體系的 1/10;
③ 如果所用的幾種快速內(nèi)切酶的最適反應溫度不同,應先以最適溫度低的酶開始酶切,再添加最適溫度較高的酶,在其最適反應溫度下進行酶切反應。
3. 適用于質粒的擴大反應體系:
DNA1 μg2 μg3μg4 μg5 μg
NotI1 μl2μl3 μl4 μl5 μl
10× Cut  Buffer 或 10× Cut Color Buffer2 μl2 μl3 μl4 μl5 μl
Total20 μl20 μl30 μl40 μl50 μl
注:如果總反應體系大于 20 μl,應適當增加溫育時間,盡量使用水浴、金屬浴或沙浴。
不同 DNA 中的酶切位點數(shù)量:
λDNAΦX174pBR322pUC57pUC18/19SV40M13mp18/19Adeno2
00000007

甲基化修飾影響:
DamDcmCpGEcoKIEcoBI
無影響無影響序列可能重疊剪切阻斷無影響無影響

在不同反應緩沖液中的活性:

Cut BufferThermo Scientific
FastDigest Buffer
NEB
CutSmart®
Buffer
Takara
QuickCut™ Buffer
活性100%100%100%100%
儲存/保存方法
-20℃,有效期2年。
技術指標
建議反應條件:
1× Cut 緩沖液;
37℃溫育;
參照“DNA 快速酶切流程"配制反應體系。
失活條件:
80℃溫育 20 min。
質量控制:
功能活性檢測:
最適反應溫度下,在 20 μl 反應體系中,1 μl NotI 能夠在 15 min 內(nèi)*消化 1 μg λDNA (HindIII digest)。
超長時間溫育檢測:
最適反應溫度下,將 1 μl NotI 與 1 μg λDNA (HindIII digest) 共同溫育 3 h,未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解,延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。
酶切 - 連接 - 再酶切檢測:
最適反應溫度下,使用 1 μl NotI 消化底物,回收酶切產(chǎn)物。在 22℃下使用適量 Fast T4 DNA Ligase 可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后,使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。
非特異性內(nèi)切酶活性檢測:
最適反應溫度下,將 1 μl NotI 與 1 μg 超螺旋質粒DNA 共同溫育 4 h,使用瓊脂糖凝膠電泳檢測,質粒 DNA 仍然處于超螺旋狀態(tài)。
藍白斑檢測:
將含有單一 lacZα 基因的載體以 1 μl NotI 消化,重新連接后轉化入大腸桿菌感受態(tài)細胞,涂布在含有對應抗生素、IPTG和 X-gal 的 LB 培養(yǎng)基平板上。連接正確的產(chǎn)物會生長出藍色菌落,而連接錯誤(即 DNA 末端切口不完整)的產(chǎn)物將得到白色菌落。對于愛必信的系列限制酶而言,白色菌落比例應小于 1%。
溫馨提示:本產(chǎn)品僅作科研實驗使用,不支持臨床等研究


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