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產品介紹：

該產品是專門用于懸浮細胞核酸高效轉染的試劑盒。它具有非常好的轉染性能，可高效轉染絕大多數懸浮細胞，在部分懸浮細胞中，轉染效率可高達85%以上（EGFP質粒）。其功能強大，不僅可高效轉染較大分子的質粒 DNA，還可高效轉染 mRNA、siRNA、mimics 和各種小分子 DNA。與目前市場上常見的脂質體轉染試劑不同， 該產品采用生物可降解材料配制，對細胞的毒性很低，轉染后 24 小時細胞幾乎無明顯死亡。使用也非常方便，先將轉染試劑與質粒 DNA 混合，再將轉染試劑-DNA 復合物直接加入培養(yǎng)細胞中，血清不影響其轉染效果，不必刻意添加或更換培養(yǎng)液，操作十分簡便。

產品特點：

1、較好的細胞轉染性能：可高效轉染多種懸浮細胞，轉染效率可高達85%以上；

2、轉染功能強大，不僅可高效轉染大分子質粒DNA，還可高效轉染mRNA、siRNA、mimics和各種小分子DNA；

3、極低的細胞毒性：使用可降解生物材料，細胞毒性低，轉染細胞死亡率不到10%，大大降低了因細胞毒性對實驗結果的影響；

4、操作簡便，可用于含血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞的轉染，轉染前后不需要更換培養(yǎng)液。

操作步驟：

一、質粒DNA 轉染（以24 孔板轉染為例）:

A、 細胞接種:

1、轉染前一天或者兩天接種細胞，接種細胞量為4-7×10 5 個；

2、確保轉染時細胞比活度為90%以上，且生長狀態(tài)良好；

3、如果細胞在轉染前一天鋪板，轉染時可以不用換液，如果細胞在轉染前兩天鋪板，轉染時最好換液。

B、SP /DNA轉染復合物制備(該步完成后應立即進行轉染):

1、在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基，再加入適量的轉染試劑，見附表。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

2、在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基，并加入適量的溶液A，輕輕混勻，再加入適量的DNA，見附表。用移液器再次輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

3、將DNA-培養(yǎng)基混合物滴加至SP-培養(yǎng)基混合物中，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15~20分鐘后，立即轉染。注意： SP-培養(yǎng)基混合物和DNA-培養(yǎng)基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。

注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。

C、轉染:

1、 將擬轉染細胞強烈振蕩20-40秒，確保培養(yǎng)細胞分散成單細胞懸液，無細胞結團。

2、 將步驟B制備的轉染復合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板以使復合物均勻分布。加完后，立即將培養(yǎng)板轉入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3、 培養(yǎng)24~96小時后觀察或收獲。

4、 SP在培養(yǎng)基中仍有較高的轉染效率，因此轉染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基。因收獲蛋白需要，可以使用懸浮細胞培養(yǎng)專用的無血清培養(yǎng)基。

二、siRNA 轉染（以24 孔板轉染為例）:

A、細胞接種:

1、轉染前一天對細胞進行轉接，使轉染時細胞密度為30-50%左右，且生長良好、無支原體污染（非常重要）；

2、最好在轉染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉染后孵育階段細胞密度太大、營養(yǎng)不足導致細胞死亡。

B、SP /siRNA轉染復合物制備 (該步完成后應立即轉染):

1、在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基，并添加適量的轉染試劑(見下表) 。用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

2、在1.5 ml無菌離心管中加入50µl無血清培養(yǎng)基，并添加適量的siRNA（見下表），用移液器輕輕混勻后在室溫靜置5分鐘。

3、將siRNA-培養(yǎng)基混合物滴加至SP-培養(yǎng)基混合物中，用移液器輕輕混勻后在室溫靜置15~20分鐘后，立即轉染。

C、轉染:

1、將擬轉染細胞強烈振蕩20-40秒，確保培養(yǎng)細胞分散成單細胞懸液，無細胞結團。

2、將步驟B制備的轉染復合物滴加至培養(yǎng)基中，邊加邊輕輕晃動培養(yǎng)板。加完后，立即將培養(yǎng)板轉入培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

3、37°C培養(yǎng)24-72h，檢測基因抑制效果。如果需要，細胞培養(yǎng)4-6h時可以更換培養(yǎng)基，但不是必須。

4、SP在培養(yǎng)基中仍有較高的轉染效率，因此轉染前后不需要換成無血清或低血清培養(yǎng)基。

注意事項：

1、剛開始轉染，請務必進行優(yōu)化實驗，如24孔板質粒轉染，每孔質粒用量0.8ug，SP 可選擇2.0ul、2.5ul、3.0ul、3.5ul進行優(yōu)化。24孔板siRNA轉染，SP 用量2ul，siRNA用量可選10pmol、20pmol、30pmol、40pmol進行優(yōu)化。

2、在制備DNA或siRNA轉染復合物時，應避免制備體系中存在血清，因血清會干擾SP 與DNA或siRNA形成復合物。培養(yǎng)體系中盡量不要添加抗生素，抗生素會導致培養(yǎng)細胞死亡。

3、溶液A僅用于質粒轉染，RNA或siRNA轉染不需加入溶液A。

4、請注意質粒轉染和siRNA轉染時對細胞密度和轉染試劑用量等條件的差異，不要混用同一條件。

5、懸浮細胞轉染難度大，且受細胞種類、細胞密度、細胞生長情況、培養(yǎng)方法、操作手法等因素的影響，研究者在轉染之前，應查閱相關文獻，認真準備轉染方案，并對轉染效果有比較理性的判斷。

6、本產品適合于質粒DNA、siRNA分別獨立轉染，如需質粒DNA、siRNA共轉，請選用核酸共轉染試劑abs60317。

附表 1： 質粒轉染不同培養(yǎng)體系推薦初始轉染條件

附表 2：siRNA 轉染不同培養(yǎng)體系推薦初始轉染條件

保存方法：

-20°C 避光保存，有效期1年，使用前請輕輕混勻

技術指標：