目錄:愛必信（上海）生物科技有限公司>>生化試劑>>植物提取物>> abs60322Lipofect5000 質粒轉染試劑
| CAS | - | 純度 | - |
|---|---|---|---|
| 分子量 | - | 分子式 | - |
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 0.5ml；1.0ml |
| 貨號 | abs60322 | 應用領域 | 生物產(chǎn)業(yè) |
| 主要用途 | 適用于將質粒DNA轉染入哺乳動物細胞 |
產(chǎn)品描述：
Lipofect5000是在研究了國外同類產(chǎn)品性能的基礎上開發(fā)的一款高性能通用型核酸轉染試劑，適用于將質粒DNA轉染入哺乳動物細胞。Lipofect5000具有非常優(yōu)異的轉染性能，可轉染絕大多數(shù)貼壁細胞和部分懸浮細胞。在貼壁培養(yǎng)的AAV293細胞中，Lipofect5000質粒DNA（EGFP質粒）的轉染陽性率可高達90%以上，即使對于較難轉染的RAW264.7細胞，Lipofect5000的質粒轉染陽性率也可高達70%。與部分國際品牌相比，Lipofect5000擁有更高的DNA轉染性能，價格也親和，是進行DNA轉染實驗的理想選擇。
產(chǎn)品特點：
1、可高效轉染多種貼壁細胞和部分懸浮細胞等，在貼壁細胞中的轉染陽性率可高達90%以上。
2、 顯著的性價比優(yōu)勢，轉染性能顯著優(yōu)于部分國際品牌而價格不足其30%。
產(chǎn)品組分：
Lipofect5000 | Trans buffer |
0.5ml | 25ml |
1ml | 50ml |
應用：
適用細胞系：HeLa,Huh-7，CCD-14Br，SBC-1,A-172，NB-1,COS-7,293T,人肝細胞，原代大鼠肝細胞，雞胚胎心肌細胞等。
貼壁細胞轉染方法步驟（以24孔板轉染質粒DNA為例）:
A、細胞接種：
1、 轉染前一天將細胞鋪板（使用不含抗生素的培養(yǎng)基），每孔1.5-2.0×105個細胞左右，使轉染時細胞密度為80%；
2、最好在轉染開始之前更換新鮮的含血清培養(yǎng)基，以防轉染后孵育階段細胞密度太大、營養(yǎng)不足導致細胞死亡。
B、Lipofect5000/DNA復合物包裝（該步完成后應立即進行轉染）：
1、在1.5ml無菌離心管中加入50ul Trans buffer，并添加適量的DNA（參見附表），用移液器輕輕混勻成DNA稀釋液。
2、使用前混勻轉染試劑，立即往DNA稀釋液中添加適量的轉染試劑，用移液器輕輕混勻。
3、將Lipofect5000/DNA混合物室溫靜置15分鐘后，立即轉染。
注意：離心管最好使用聚丙烯離心管。
C、轉染：
1、將步驟B制備的復合物滴加至細胞培養(yǎng)孔中。輕輕晃動培養(yǎng)板以使復合物均勻分布。
2、 培養(yǎng)24小時后即可觀察，但最佳觀察時間為36小時。如果需要，細胞培養(yǎng)6-24小時后可以更換新鮮培養(yǎng)基，但不是必須。
3、 收獲細胞，進行后續(xù)實驗。對于穩(wěn)定轉染，在轉染24-48小時后，用選擇培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)。
儲存/保存方法：
4-8°C 保存，有效期一年，使用前請輕輕混勻。
技術指標：
附 貼壁細胞培養(yǎng)體系推薦初始轉染條件：
培養(yǎng)皿 | 96 | 48 | 24 | 12 | 6 | 10cm 皿 | |
表面積(cm2) | 0.35 | 1.0 | 1.9 | 3.8 | 9.6 | 59 | |
復合物包裝Trans buffer、試劑、DNA量 | Trans buffer(ul) | 10 | 25 | 50 | 100 | 200 | 1000 |
Lipofect5000 (ul) | 0.25 | 0.5 | 1.2 | 2.4 | 4.8 | 24 | |
1ug/ul plasmid (ul) | 0.15 | 0.3 | 0.8 | 1.5 | 3 | 15 | |
培養(yǎng)基(ml) | 0.1 | 0.25 | 0.5 | 1 | 2 | 10 | |
注意事項：
1、剛開始使用，建議進行細胞密度優(yōu)化實驗，如可在培養(yǎng)板中分別接種1.5×105、2.0×105、2.5×105個細胞，分別進行DNA轉染，以選擇出轉染效果較好的細胞接種密度。
2、應避免轉染復合物中存在血清，因為血清會干擾轉試劑與DNA形成復合物，在轉染過程中不要向培養(yǎng)基中添加抗生素。
溫馨提示：本產(chǎn)品僅作科研實驗使用，不支持臨床等研究
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