簡介

細胞遷移（細胞從一個位置移動到另一個位置）是正?；虍惓＜毎^程中的一個關(guān)鍵部分。細胞遷移在各種生物過程中的重要性促使了開發(fā)用于研究機制的系統(tǒng)，這些機制旨在確定能夠促進（傷口愈合）或抑制（腫瘤形成）細胞遷移的治療成分。

本研究著重探討了使用 SpectraMax® MiniMax 300細胞成像計數(shù)儀的可行性，這是 SpectraMax® i3 多功能微孔板讀板機的可選升級，可使用 Platypus Technologies公司 的 Oris Pro細胞遷移實驗來可視化和分析細胞遷移。該檢測利用無毒生物相容性凝膠，該凝膠溶解并在每個孔的中心形成無細胞檢測區(qū)，從而可以研究細胞進入檢測區(qū)時所涉及的細胞遷移機制。

材料和方法

細胞培養(yǎng)和檢測

將 HT1080 細胞接種到隨 Oris Pro 細胞遷移檢測提供的 96 孔（20，000 個細胞/孔）或 384 孔（8，000 個細胞/孔）Corning 黑色透明底板中。這里使用了 I 型膠原蛋白包被版本（Platypus Technologies 產(chǎn)品目錄 #PROCMACC1）。該檢測使用無毒生物相容性凝膠在細胞培養(yǎng)表面上形成無細胞區(qū)。

接種后，將細胞置于加濕室（37°C；5% CO2）中約四小時，以允許細胞粘附。隨后，將含有測試化合物 cytochalasin D（一種已知會破壞細胞遷移的細胞滲透性霉菌毒素）或含有 0.1% DMSO 空白對照的新鮮培養(yǎng)基加入。

48 小時后，將孔板從培養(yǎng)箱中取出。MiniMax 細胞成像儀用于采集每個孔的透射光圖像，以便以后使用 Molecular Devices StainFree 細胞檢測技術(shù)進行分析。

細胞按照制造商說明書用 CellTracker綠色 CMFDA 染料（Thermo cat. # C2925）染色，使用 MiniMax 細胞成像儀的綠色熒光通道采集熒光圖像。采集圖像后，進行熒光終點讀?。ぐl(fā) 472 nm，發(fā)射 526 nm）以確定SpectraMax® i3 讀板機可用于檢測細胞遷移。

優(yōu)勢

準確測量每孔單個圖像的細胞遷移

通過寬信號窗口獲得 StainFree 或熒光圖像分析的靈活性

使用 SoftMax Pro 軟件自動分析包含遷移細胞的感興趣區(qū)域