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詳細介紹
兔原代鞏膜上皮細胞專用培養(yǎng)基
產品分類 | 原代細胞專用培養(yǎng)基 |
規(guī)格 | 100mL/500mL |
貨號 | GOY-XP3185 |
兔原代鞏膜上皮細胞培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測試，本產品可保持兔原代鞏膜上皮細胞優(yōu)良的生長狀態(tài)。
本產品中已包含兔原代鞏膜上皮細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于兔原代鞏膜上皮細胞的培養(yǎng)。
名稱 | 體積 | 濃度 | 保存條件 |
原代上皮細胞基礎培養(yǎng)基 | 500ml | 1× | 4℃、避光 |
原代上皮細胞培養(yǎng)添加劑 | 5ml | 100× | -20℃、避光 |
胎牛血清（FBS） | 50ml | 終濃度10% | -20℃、避光 |
注意事項
僅限科研用。
培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內部；這部分有害物質的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。
| 儀器 | 試劑 | 耗材 |
| 離心機 | 胎牛血清（FBS） | 離心管（15ml、50ml） |
| 生物安全柜 | 無菌 1×PBS pH=7.2 | T-25 細胞培養(yǎng)瓶 |
| 電動移液器 | 0.25%+0.02%EDTA | 一次性無菌移液管（2ml、5ml、10ml） |
| CO2 培養(yǎng)箱 | 培養(yǎng)基（含血清） | 1.8mL 凍存管 |
| 倒置顯微鏡 | 凍存液：90%FBS+10%DMSO | 程序降溫盒 |
復蘇
1) 將恒溫水浴鍋中的水預熱到 37℃；
2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預熱；
3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復蘇的細胞，盡快轉入 37℃恒溫水浴鍋中
復溫晃動凍存管以提高復溫速率；
4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；
5) 準備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；
6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細胞后，轉入 T-25 細胞培養(yǎng)中，混勻后轉入
CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。
傳代 （細胞傳代建議一傳二）
1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。
2) 在生物安全柜內，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內的培養(yǎng)基；
3) 向培養(yǎng)瓶內加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；
4) 向瓶內加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；
5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；
① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；
② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫。
6) 1000rpm 離心 5min；
7) 準備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。
8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；
9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）
1）~6）參照傳代步驟
7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉入 1.8ml 凍存管中；
8）將凍存管轉入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉入-80℃冰箱中過夜降溫；
9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉入液氮罐中保存。
?無菌操作?：細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。
?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產品。
?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應按細胞類型選擇合適培養(yǎng)液。
?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內濕度應保持在95%左右。
?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。
?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。
踝蛋白(TLN)重組蛋白 Recombinant Talin (TLN)
ACVR1B Protein Human 重組人 ALK4 / ACVR1B 蛋白 (His & Fc 標簽)
KLRC1重組小鼠 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 蛋白 (His 標簽) Protein
NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 標簽)
CBR3重組人 CBR3 / HCBR3 / Carbonyl Reductase 3 蛋白 (His 標簽) Protein
小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA 試劑盒
Rat aquaporin 5 (AQP-5) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白5(AQP-5)試劑盒
Humanplacealribonucleaseinhibitor,HPRIELISAKit 人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)試劑盒 進口分裝
HumanCiliaryNeuroophicFactor,CF試劑盒人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CF)試劑盒
組(leucine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次
humanS100calciumbindingproteinA8/calgranulinA,S100A8ELISAKit人S100鈣結合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)試劑盒
脂肪酸合成酶（FAS）測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
蔗糖0酸化酶(SP)測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
硫氧還蛋白氧化還原酶（xR）測試盒 可見分光光度法 50管/48樣
還原酶（GR）測試盒 紫外分光光度法 50管/48樣
植物滲調蛋白(Osmotins)試劑盒
Human ai glucoprotein 210 (gp210) ELISA Kit 人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)試劑盒
PorcineInsulin,INSELISAKit 豬胰島素(INS)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforaFGF-1ELISAKit大鼠酸性成纖維細胞生長因子1
血液血管緊張素Ⅰ轉化酶2(ACE2)活性比色法定量試劑盒20次
Mousetarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit小鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)試劑盒
FITC標記小鼠CD45RB單克隆抗體
黑色素瘤抑制活性蛋白3抗體
兔原代鞏膜上皮細胞專用培養(yǎng)基KLRC1重組小鼠 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 蛋白 (His 標簽) Protein
踝蛋白(TLN)重組蛋白 Recombinant Talin (TLN)
CBR3重組人 CBR3 / HCBR3 / Carbonyl Reductase 3 蛋白 (His 標簽) Protein
ACVR1B Protein Human 重組人 ALK4 / ACVR1B 蛋白 (His & Fc 標簽)
NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 標簽)
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