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產(chǎn)品名稱：原代食管癌條件重編程培養(yǎng)基(Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說明：原代食管癌條件重編程培養(yǎng)基（Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進食管鱗癌原代細胞體外生長而設(shè)計的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng)，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基產(chǎn)品基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO2/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時，pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個理想平衡的營養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進體外人食管鱗癌原代細胞的生長。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近

使用說明
?使用前準備

（1）y射線照射過的NIH-3T3細胞（40Gy輻照）。

（2）15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細胞培養(yǎng)基平衡至室溫。

?食管癌原代細胞培養(yǎng)

（1）初次分離的食管癌小樣本細胞懸液一般無需計數(shù)，直接種入12孔板中。

（2）食管癌術(shù)中樣本過70微米篩網(wǎng)后計數(shù)，按照表1中細胞數(shù)接種在合適的培養(yǎng)器皿中，加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞（添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1和表2所示）。

（3）原代細胞初次接種后2-3天勿動（利于細胞貼壁），培養(yǎng)過程中若培養(yǎng)基顏色變黃但細胞未長滿時可換半液，鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時，適量補充γ射線輻照后的3T3細胞（一般補加初始數(shù)目的一半）。

注∶針對實體瘤樣本，細胞粒徑大于10微米進行計數(shù);倍增時間>48小時則定義為增殖較慢的細胞;對于增殖較快細胞，可以綜合倍增時間、接種器皿的規(guī)格以及培養(yǎng)周期來估算接種的細胞數(shù)量;表格供參考，具體實驗具體對待。
?食管癌原代細胞傳代

(1) 鏡下觀察細胞形成克隆，且匯合度達到80~90%時即可傳代。

(2) 培養(yǎng)箱中取出細胞，棄舊培養(yǎng)液，0.25%胰酶洗滌30秒后吸盡，再加入適量0.05%胰酶，37℃孵育，5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面，顯微鏡下觀察細胞消化情況。

(3) 細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用終止培養(yǎng)基終止消化，并將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中，1500rpm離心3 min。

(4) 棄上清，以1-2mL相對應(yīng)的原代細胞培養(yǎng)基重懸細胞，活細胞計數(shù)，將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板，加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞（不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積、接種原代細胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1或表2所示）。

(5) 補加原代細胞培養(yǎng)基至所需體積，輕輕搖晃混勻，表面消毒后置培養(yǎng)箱，37℃、5%CO2條件培養(yǎng)。

注意事項：

1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。

2.本產(chǎn)品中含有胎牛血清和原代細胞專用抗生素，如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可直接使用。

3.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。

4.請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。

5.原代細胞初次接種時會貼壁較慢和貼壁不牢，若無必要，盡量減少取出觀察的次數(shù)，建議2-3天一次。

6.傳代消化時切記不要消化過度，對細胞造成損傷，影響細胞狀態(tài)。

7.接種細胞時注意細胞密度，不可過稀或過密。

8.樣本需為食管鱗癌術(shù)中或內(nèi)鏡樣本，且腫瘤細胞比例越高（至少>50%），培養(yǎng)成功率越高，不推薦用于少量樣本（如循環(huán)腫瘤細胞）的培養(yǎng)。

9.使用產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作，避免污染。

10.本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。

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