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HT1080(HT-1080)細(xì)胞：人纖維肉瘤細(xì)胞       YKLHT-1080

種屬：人；貼壁生長(zhǎng)；生長(zhǎng)周期：3~4天

組織來(lái)源結(jié)締組織；纖維肉瘤

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

背景描述 HT-1080細(xì)胞含有活化的N-ras癌基因。

生長(zhǎng)培養(yǎng)基MEM(貨號(hào):PM150410)＋10% FBS(貨號(hào):164210-500)＋1% P/S(貨號(hào):PB180120)

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

溫度：37℃

HT-1080（人纖維肉瘤細(xì)胞）培養(yǎng)：

1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺(tái)內(nèi)，固定在泡沫板上。

2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開(kāi)皮膚一個(gè)橫切口，將皮膚向上撕開(kāi)，然后剪開(kāi)肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭鑷取出脾臟，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中。

3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無(wú)用的組織。

4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭yk鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨，同時(shí)不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。

5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。

6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計(jì)數(shù)。

7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。

HT-1080（人纖維肉瘤細(xì)胞）細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。

4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備

記錄方式可采用攝影照片、縮時(shí)電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應(yīng)用的學(xué)科領(lǐng)域較為寬廣，如細(xì)胞學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、生物化學(xué)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)等；

適用的對(duì)象范圍廣，從低等動(dòng)物到高等動(dòng)物，一種動(dòng)物的不同年齡階段以及不同組織，都可進(jìn)行有針對(duì)性的研究。

6.研究的費(fèi)用相對(duì)較經(jīng)濟(jì)

HT-1080 [HT1080]（人纖維肉瘤細(xì)胞）保種心得：

首先，細(xì)胞采購(gòu)的運(yùn)輸形式一般分為兩種，一種是直接寄送凍存細(xì)胞，一種是復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞。前者是由液氮中取出細(xì)胞凍存管，采用干冰運(yùn)輸；后者是將細(xì)胞復(fù)蘇至T-25培養(yǎng)瓶中，采用常溫運(yùn)輸。兩者各有優(yōu)缺點(diǎn)，第一種方式的優(yōu)點(diǎn)是可以長(zhǎng)途運(yùn)輸，因?yàn)榧?xì)胞在干冰中相對(duì)穩(wěn)定，一般可以保證數(shù)周之內(nèi)不影響細(xì)胞活性，但缺點(diǎn)是運(yùn)輸成本高，且細(xì)胞復(fù)蘇是很復(fù)雜的過(guò)程，如果細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳，則很難界定是來(lái)源的問(wèn)題還是復(fù)蘇操作的問(wèn)題；而第二種方式的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞收到后可以直接通過(guò)觀察來(lái)大體了解細(xì)胞狀態(tài)，并且對(duì)運(yùn)輸?shù)囊笙鄬?duì)較低，缺點(diǎn)則是只適合短途運(yùn)輸，因?yàn)榧幢氵\(yùn)輸時(shí)培養(yǎng)基中不添加血清，細(xì)胞還是會(huì)不斷增殖，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿后，細(xì)胞的狀態(tài)會(huì)隨時(shí)間的增加而不斷變差。綜上，如果是從國(guó)外大型細(xì)胞庫(kù)采購(gòu)，一般采用第一種方法，既能適應(yīng)長(zhǎng)途運(yùn)輸，且大型細(xì)胞庫(kù)的凍存細(xì)胞質(zhì)量普遍較好，在良好的操作下復(fù)蘇成活率很高；如果是從國(guó)內(nèi)細(xì)胞庫(kù)采購(gòu)，則一般采用第二種方法，方便收到細(xì)胞時(shí)能較好掌握細(xì)胞狀態(tài)，并且降低運(yùn)輸成本。