腺相關(guān)病毒（AAV）源自有缺陷的細(xì)小病毒，它們依賴其他病毒（如腺病毒和皰疹病毒）提供的必需輔助功能，以實(shí)現(xiàn)高效的病毒復(fù)制和傳播。AAV與任何已知疾病沒病因?qū)W關(guān)聯(lián)，并且已成功用于在多種組織中建立高效且長期的基因表達(dá)，而不會(huì)引起顯著的細(xì)胞免疫反應(yīng)或毒性。

AAV具有單鏈DNA基因組，長度約為4.7 kb。所有已鑒定的AAV血清型都具有三個(gè)關(guān)鍵特征，包括兩個(gè)AAV末端重復(fù)序列（ITR）、一個(gè)rep區(qū)和一個(gè)cap區(qū)。ITR能夠形成T形二級(jí)結(jié)構(gòu)，是AAV復(fù)制、包裝、整合和拯救所需的唯1順式元件。rep區(qū)編碼四種重疊蛋白，分別命名為Rep78、Rep68、Rep52和Rep40，這是根據(jù)蛋白的表觀分子質(zhì)量來命名的。除了在AAV復(fù)制中的明確作用外，Rep蛋白還調(diào)節(jié)AAV的包裝和特異性整合。cap區(qū)編碼三種結(jié)構(gòu)蛋白：VP1、VP2和VP3。這三種蛋白共享相同的閱讀框。

Cell Biolabs的AAV無輔助病毒系統(tǒng)允許在不使用輔助病毒的情況下生產(chǎn)具有感染性的重組人腺相關(guān)病毒（rAAV）顆粒（見圖2）。在AAV無輔助病毒系統(tǒng)中，生產(chǎn)感染性AAV顆粒所需的大多數(shù)腺病毒基因產(chǎn)物由共轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中的質(zhì)粒pHelper提供（即E2A、E4和VA RNA基因）。其余的腺病毒基因產(chǎn)物由293宿主細(xì)胞提供，這些細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)腺病毒E1基因。通過消除對(duì)活輔助病毒的需求，AAV無輔助病毒系統(tǒng)提供了一個(gè)更安全、更便捷的基因傳遞系統(tǒng)。在AAV無輔助病毒系統(tǒng)中，rep和cap基因已從含有AAV-2 ITR的病毒載體中移除，并在質(zhì)粒pAAV-RC上以反式提供。移除AAV的rep和cap基因使得可以在病毒基因組中插入感興趣的基因。Cell Biolabs的AAV無輔助病毒系統(tǒng)可以容納長達(dá)3 kb的插入片段。

作為Cell Biolabs全國總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Cell Biolabs熱銷產(chǎn)品pAAV-KP1矢量。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

相關(guān)產(chǎn)品

1. VPK-400-DJ：AAV-DJ無輔助病毒包裝系統(tǒng)  

2. AAV-100：293AAV細(xì)胞系  

3. VPK-140：ViraBind? AAV純化試劑盒  

4. VPK-141：ViraBind? AAV純化超大試劑盒  

5. VPK-145：QuickTiter? AAV定量試劑盒  

6. AAV-200：ViraDuctin? AAV轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑盒  

結(jié)果示例

以下圖表展示了使用Cell Biolabs的AAV無輔助病毒系統(tǒng)的典型結(jié)果。以下數(shù)據(jù)僅供參考。

圖5：AAV2-GFP的生產(chǎn)和轉(zhuǎn)導(dǎo)

通過共轉(zhuǎn)染293AAV細(xì)胞（貨號(hào)AAV-100）與pAAV-GFP（貨號(hào)AAV-400）、pAAV-RC2和pHelper來生產(chǎn)AAV2-GFP。293AD細(xì)胞（貨號(hào)AD-100）用AAV2-GFP病毒上清感染48小時(shí)。左上：轉(zhuǎn)染前的293AAV細(xì)胞（10倍）；右上：轉(zhuǎn)染后48小時(shí)的293AAV細(xì)胞（10倍）；左下：轉(zhuǎn)染后48小時(shí)293AAV細(xì)胞中的GFP表達(dá)（10倍）。右下：轉(zhuǎn)導(dǎo)后48小時(shí)293AD細(xì)胞中的GFP表達(dá)（20倍）。

文獻(xiàn)參考：

1. Auricchio, A., Hildinger, M., O'Connor, E., Gao, G. P. and Wilson, J. M. (2001) Hum Gene Ther 12:71–6.

2. Brument, N., Morenweiser, R., Blouin, V., Toublanc, E., Raimbaud, I. et al. (2002) Mol Ther 6:678–86.

3. Clark, K., Liu, X., McGrath, J., and Johnson, P. (1999) Hum. Gene Ther., 10, 1031-1039.

4. Graham, F. L., Smiley, J., Russell, W. C. and Nairn, R. (1977) J Gen Virol 36:59-74.

5. Grimm, D. and Kleinschmidt, J. A. (1999) Hum Gene Ther 10:2445-50.

Cell Biolabs公司位于美國加利福尼亞州南部重要的工業(yè)城市圣迭戈（San Diego），是有名的細(xì)胞學(xué)試劑品牌，作為前沿的細(xì)胞學(xué)分析檢測試劑盒生產(chǎn)商，為生物技術(shù)和研究類客戶提供好的基于細(xì)胞功能研究以及疾病等方面的g端產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。產(chǎn)品主要涵蓋細(xì)胞研究、細(xì)胞信號(hào)通路和蛋白質(zhì)生物學(xué)、代謝研究、病原體和毒素、干細(xì)胞研究等領(lǐng)域。全球眾多大學(xué)、政府研究機(jī)構(gòu)、生物、制藥企業(yè)的科研實(shí)驗(yàn)室均在使用Cell Biolabs的產(chǎn)品。  

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