逆轉(zhuǎn)錄病毒基因轉(zhuǎn)移是一種高效地將穩(wěn)定、可遺傳的遺傳物質(zhì)引入任何分裂細(xì)胞類型基因組的技術(shù)?；谀迥嵝∈蟀籽〔《荆∕MLV）的載體，對于大多數(shù)有絲分裂細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)導(dǎo)效率可達(dá)到超過90%，并且通過改變感染復(fù)數(shù)可以輕松控制每個細(xì)胞的拷貝數(shù)。

當(dāng)前的逆轉(zhuǎn)錄病毒基因轉(zhuǎn)移技術(shù)基于包裝細(xì)胞系和逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體的協(xié)調(diào)設(shè)計(jì)。包裝細(xì)胞系通常包含病毒的gag、pol和env基因，這些基因?qū)τ诓《绢w粒的形成和復(fù)制是必需的，并且它們被穩(wěn)定整合到包裝細(xì)胞的基因組中。逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體提供包裝信號ψ+、轉(zhuǎn)錄和處理元件以及目標(biāo)基因。插入片段長達(dá)6.5 kb可以被高效包裝。將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體轉(zhuǎn)染到包裝細(xì)胞系中可以產(chǎn)生高滴度、復(fù)制缺陷型病毒。

由包裝細(xì)胞系表達(dá)的病毒env基因編碼包膜蛋白，該蛋白決定了包裝病毒的感染范圍（嗜性）。病毒包膜根據(jù)用于進(jìn)入宿主細(xì)胞的受體進(jìn)行分類（見表1）。嗜性病毒只能識別小鼠和大鼠細(xì)胞上的一種受體。兩性病毒可以識別廣泛哺乳動物細(xì)胞類型上的一種受體。泛嗜性病毒，例如用囊泡性口炎病毒（VSV-G）包膜糖蛋白假型化的逆轉(zhuǎn)錄病毒，可以感染哺乳動物和非哺乳動物細(xì)胞。與其他病毒包膜蛋白不同，VSV-G通過脂質(zhì)結(jié)合和質(zhì)膜融合介導(dǎo)病毒進(jìn)入。然而，VSV-G包膜蛋白的穩(wěn)定表達(dá)是有毒的，因此泛嗜性病毒通常是通過瞬時共轉(zhuǎn)染逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體和pVSV-G到僅表達(dá)病毒gag和pol基因的泛嗜性包裝細(xì)胞系中產(chǎn)生的。

傳統(tǒng)的基于NIH-3T3的逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系和Phoenix包裝細(xì)胞系由于包裝細(xì)胞中逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)構(gòu)蛋白（gag、pol、env）的表達(dá)水平較低，導(dǎo)致病毒產(chǎn)量低且穩(wěn)定性有限?；?93T細(xì)胞系的Platinum包裝細(xì)胞系是一種高效的逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系，通過使用帶有EF1α啟動子的新型包裝構(gòu)建體生成，以確保更長的穩(wěn)定性和高產(chǎn)量的逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)構(gòu)蛋白表達(dá)（gag、pol、env）。在藥物選擇的條件下，Platinum細(xì)胞可以保持良好的狀態(tài)至少4個月，并且通過瞬時轉(zhuǎn)染可以產(chǎn)生平均滴度為1×10?感染單位/mL的逆轉(zhuǎn)錄病毒。此外，由于僅使用病毒結(jié)構(gòu)基因的編碼序列，避免了任何不必要的逆轉(zhuǎn)錄病毒序列，因此幾乎不存在復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒（RCR）。

Cell Biolabs的嗜性Platinum逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)系統(tǒng)提供了一種簡單的方法，用于高效生成無RCR的嗜性逆轉(zhuǎn)錄病毒。該試劑盒包括Plat-E包裝細(xì)胞、pMXs-Puro、pMXs-Neo逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)載體和pMXs-GFP對照載體。

作為Cell Biolabs全國總代理，艾美捷科技強(qiáng)烈推薦Cell Biolabs熱銷產(chǎn)品鉑逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)系統(tǒng)，包裝細(xì)胞系。產(chǎn)品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

相關(guān)產(chǎn)品

1. RV-200：ViraDuctin?逆轉(zhuǎn)錄病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑盒  

2. VPK-120：QuickTiter?逆轉(zhuǎn)錄病毒定量試劑盒  

3. VPK-301：Platinum逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)系統(tǒng)（兩性）  

4. VPK-302：Platinum逆轉(zhuǎn)錄病毒表達(dá)系統(tǒng)（泛嗜性）  

試劑盒組成（干冰運(yùn)輸）

1. Plat-E逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系（部件編號RV-101）：一支無菌管——1.0 mL，細(xì)胞濃度>3×10?個/mL，含20%胎牛血清和10% DMSO的DMEM培養(yǎng)基。  

2. pMXs-Puro（部件編號RTV-012）：一支無菌管——10 ?g的pMXs-Puro質(zhì)粒，濃度為0.25 ?g/?L，溶于TE緩沖液。  

3. pMXs-Neo（部件編號RTV-011）：一支無菌管——10 ?g的pMXs-Neo質(zhì)粒，濃度為0.25 ?g/?L，溶于TE緩沖液。  

4. pMXs-GFP（部件編號RTV-050）：一支無菌管——10 ?g的pMXs-GFP質(zhì)粒，濃度為0.25 ?g/?L，溶于TE緩沖液。  

未提供材料

1. Plat-E培養(yǎng)基：DMEM，10%胎牛血清（FBS），1 ?g/mL嘌呤霉素，10 ?g/mL殺稻瘟菌素，青霉素和鏈霉素。  

2. Platinum細(xì)胞凍存培養(yǎng)基：70% DMEM，20% FBS，10% DMSO。  

3. 轉(zhuǎn)染試劑。  

4. 質(zhì)粒提取試劑盒。  

保存方法

將Platinum逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝細(xì)胞系保存在液氮中，質(zhì)粒保存在-20℃。

**注意**：為獲得最佳結(jié)果，請?jiān)谑盏郊?xì)胞后立即開始培養(yǎng)。如果無法立即進(jìn)行，可將細(xì)胞保存在-80℃，直到開始培養(yǎng)。后續(xù)培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)長期保存在液氮中。

pMXs-Puro和pMXs-Neo

Cell Biolabs的pMXs逆轉(zhuǎn)錄病毒載體基于莫洛尼小鼠白血病病毒（MMLV）。該載體提供病毒包裝信號、轉(zhuǎn)錄和處理元件以及用于目標(biāo)基因克隆的多克隆位點(diǎn)（MCS）。載體包含氨芐青霉素抗性基因，用于細(xì)菌中的擴(kuò)增和抗生素選擇（見圖1）。

圖1. pMXs-Puro和pMXs-Neo逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的示意圖。

文獻(xiàn)參考：

1. Miller, A. D. & Baltimore, C. (1986) Mol. Cell. Biol. 6:2895–2902.

2. Mann, R., Mulligan, R. C. and Baltimore, D. (1983) Cell 33:153–159.

3. Morita, S., Kojim, T., and Kitamura, T. (2000) Gene Therapy 7: 1063-1066.

4. Takahashi, K. and Yamanaka, S. (2006) Cell 126: 663-676

Cell Biolabs公司位于美國加利福尼亞州南部重要的工業(yè)城市圣迭戈（San Diego），是有名的細(xì)胞學(xué)試劑品牌，作為前沿的細(xì)胞學(xué)分析檢測試劑盒生產(chǎn)商，為生物技術(shù)和研究類客戶提供好的基于細(xì)胞功能研究以及疾病等方面的g端產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。產(chǎn)品主要涵蓋細(xì)胞研究、細(xì)胞信號通路和蛋白質(zhì)生物學(xué)、代謝研究、病原體和毒素、干細(xì)胞研究等領(lǐng)域。全球眾多大學(xué)、政府研究機(jī)構(gòu)、生物、制藥企業(yè)的科研實(shí)驗(yàn)室均在使用Cell Biolabs的產(chǎn)品。  

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