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正常細胞常規(guī)核型的標本制備實驗

閱讀:273          發(fā)布時間:2019-2-15
提 供 商 上海雅吉生物科技有限公司 資料大小 250.4KB
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實驗方法原理    采用微量全血培養(yǎng)人體外周血中淋巴細胞,在淋巴母細胞分裂高峰時加入秋水仙素,破壞細胞紡錘體的形成,使細胞停止在分裂中期。然后收集細胞,低滲處理,使細胞脹大,染色體伸展。接著進行固定并除去中期分裂相中殘存的蛋白質,使染色體清晰且分散良好。再結合離心技術去掉紅細胞碎片,然后采用空氣干燥法制片獲得中期染色體標本。
實驗材料    外周血
試劑、試劑盒    640培養(yǎng)液肝素溶液秋水仙素胰蛋白酶EDTAPHAKCl甲醇冰醋酸Giemsa原液磷酸緩沖液生理鹽水
儀器、耗材    超凈臺鑷子離心機水浴箱天平離心管顯微鏡載玻片平皿
實驗步驟    
1.  打開超凈臺紫外燈20~30分鐘。

2.  洗手、換潔凈白大衣后進入操作室。啟動超凈臺,點燃煤氣燈。

3.  用75%酒精棉球擦洗手、各種試劑瓶及操作臺面,然后將培養(yǎng)液及肝素、秋水仙素、PHA等所需溶液移入超凈臺。

4.  在超凈臺內將每個培養(yǎng)瓶裝入5 ml 培養(yǎng)液及0.2 ml PHA溶液,封好備用。

5.  用5 ml 注射器,7號針頭,先吸取少許肝素濕潤針筒,然后從肘靜脈抽血1~2 ml。

6.  每個培養(yǎng)瓶接種全血0.2 ml 左右輕輕搖動使血和培養(yǎng)液混勻。

7.  在培養(yǎng)瓶上標記好供血者姓名、性別、采血日期等,放入培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)。

8.  每天輕輕震蕩培養(yǎng)瓶二、三次,防止血球沉積并保證血細胞與培養(yǎng)液充分接觸,促進細胞生長繁殖。
收起 
注意事項    
試劑配方
500 單位/ml 的肝素溶液
10μg/ml 的秋水仙素溶液
0.25%胰蛋白酶一 0.02%EDTA 混合消化液
0.5mg/ml 的 PHA 溶液
0.075mol/L 的 KCl 溶液
磷酸緩沖液(pH6.8)
其他    
1.人體外周血中淋巴細胞是成熟的免疫細胞,正常情況下處于 G。期不再增殖。PHA(Phytohemagglutinin,植物血凝素)是人和其它動物淋巴細胞的有絲分裂刺激劑,它能使處于 G0 期的淋巴細胞轉化為淋巴母細胞,進入細胞周期開始旺盛的有絲分裂。

2.人體染色體常規(guī)核型的分析,在今天的染色體研究水平上作為染色體結構異常的疾病診斷已經(jīng)失去意義,但對染色體數(shù)目異常仍具有診斷上的價值,尤其是起著分析其它幾種顯帶核型的橋梁作用。通過常規(guī)核型的分析必須掌握三點:(1)會分組;(2)了解各組染色體的基本形態(tài)特征;(3)會計數(shù)數(shù)目和鑒定性別。

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