總一氧化氮檢測試劑盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸鹽還原酶(Nitrate reductase)還原硝酸鹽(nitrate)為亞硝酸鹽(nitrite)，然后通過經(jīng)典的Griess reagent檢測亞硝酸鹽，從而測定出總一氧化氮。一氧化氮本身極不穩(wěn)定，在細(xì)胞內(nèi)很快代謝為硝酸鹽(Nitrate)和亞硝酸鹽(Nitrite)，通過上述方法檢測出硝酸鹽和亞硝酸鹽的總量，就可以推算出總的一氧化氮的量。
      總一氧化氮檢測試劑盒采用了NADPH依賴性硝酸鹽還原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。高濃度的NADPH會干擾后續(xù)的檢測，消除NADPH的一種常用方法就是使用Lactate dehydrogenase(LDH)清除NADPH。本試劑盒采用了LDH清除NADPH的方法，使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確。
      對亞硝酸鹽的檢測下限達(dá)到2微摩爾/升，在2-80微摩爾/升的范圍內(nèi)有很好的線性關(guān)系。濃度過高的樣品可以適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行檢測。
      樣品范圍廣，可以檢測細(xì)胞裂解液、組織裂解液、細(xì)胞或組織的培養(yǎng)液、血清、血漿或尿液等中一氧化氮的含量。酚紅和10%血清對測定無明顯干擾。
      樣品需要量少。根據(jù)樣品中一氧化氮的濃度不同，僅需0-60微升樣品。
      檢測速度快，僅需約80分鐘即可完成檢測。
      本試劑盒采用了間接的一氧化氮檢測方法，如需檢測細(xì)胞內(nèi)實際的一氧化氮水平，可以采用生產(chǎn)的DAF-FM DA(NO熒光探針)(S0019)。
包裝清單：
產(chǎn)品編號    產(chǎn)品名稱    包裝
S0023-1    樣品稀釋液    15ml
S0023-2    NADPH    5mg
S0023-3    FAD    550μl
S0023-4    Nitrate Reductase    250μl
S0023-5    LDH Buffer    550μl
S0023-6    LDH    500μl
S0023-7    NaNO2(1M)    1ml
S0023-8    Griess Reagent I    3ml
S0023-9    Griess Reagent II    3ml
—    說明書    1份
保存條件：
      -20℃保存，一年有效。NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I和Griess Reagent II需避光保存。NADPH配制成溶液后必須分裝并-70℃保存。 
注意事項：
      RPMI 1640等含有較高濃度硝酸鹽的培養(yǎng)液容易對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾，請盡量避免。必需使用RPMI 1640培養(yǎng)液時，在檢測一氧化氮前必需先換成其他適當(dāng)培養(yǎng)液例如DMEM、MEM、F12等，或換成HBSS或PBS等。
      推薦選購的細(xì)胞與組織裂解液(一氧化氮檢測用)(S3090)用于細(xì)胞或組織樣品的裂解。也可以自行選擇適當(dāng)方式制備細(xì)胞或組織樣品的裂解液用于總一氧化氮的檢測，但需注意自行選擇的方式可能會干擾試劑盒檢測時的酶反應(yīng)而影響檢測效果。檢測細(xì)胞或組織的培養(yǎng)液、血清、血漿或尿液中的總一氧化氮含量時，不需要選購S3090。S3090裂解獲得的樣品還可以用于蛋白濃度的檢測以及Western印跡檢測，但需注意S3090中不含蛋白酶和磷酸酯酶抑制劑。
      檢測反應(yīng)必須避光進(jìn)行。
      由于檢測過程中有還原反應(yīng)，凡是影響還原反應(yīng)的氧化或還原試劑要注意避免，例如常用的還原劑DTT和巰基乙醇。
      僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。