RT-PCR檢測試劑盒說明書
口蹄疫（foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的多種偶蹄動(dòng)物高度接觸性傳染病?？谔阋卟《緦儆谛『颂呛怂岵《究瓶谔阋卟《緦?，病毒基因組為單股正鏈 RNA，約含 8500 個(gè)核苷酸。目前已知該病毒有 7 個(gè)血清型，分別為 O、A、C、Asia1、SAT1、SAT2 和 SAT3，每種血清型包括多個(gè)亞型，各型之間無交叉保護(hù)。我國及周邊國家流行 O 型、A 型和 Asia1型 3 種血清的 FMDV，對(duì) FMDV 進(jìn)行準(zhǔn)確定型和遺傳變異分析，是 FMD 疫苗選擇和防控措施制定的重要依據(jù)。
為此，本公司建立了一種能擴(kuò)增 O 型、A 型和 Asia1 型 3 種血清型 FMDV的通用 RT-nPCR 方法，靈敏度高，特異性強(qiáng)。

RT-PCR檢測試劑盒具有下列特點(diǎn)：
1. 通用性強(qiáng)，可用于 O 型、A 型和 Asia1 型 3 種血清型 FMDV 的定性鑒定檢測和分子流行病學(xué)調(diào)查。
2. 能對(duì)樣品中 FMDV 進(jìn)行快速檢測，具有良好的特異性和敏感性。
3. 結(jié)合擴(kuò)增產(chǎn)物的克隆測序技術(shù)，可對(duì) FMDV 進(jìn)行準(zhǔn)確分型。
4. 使用一管式 RT-PCR 試劑盒，減少了操作步驟，降低了操作誤差
規(guī)格及成分 成 分 編 號(hào) 25 次包裝
2×miRNA qPCR Mix 131042A 0.75 mL
Reverse Primer(10 μM) 131042B 30 μL
RNase-Free Water 80403 1 mL
miRNA cDNA *鏈合成試劑盒 130911 25 次
使用手冊(cè) 131041sc 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。
自備試劑 樣品、qPCR 上游引物（Forward primer）等
使用方法 一、miRNA cDNA *鏈合成
請(qǐng)參見 miRNA cDNA *鏈合成試劑盒產(chǎn)品使用手冊(cè)。
二、miRNA 熒光定量檢測
1. 室溫融化 2×miRNA qPCR Mix 和 Reverse primer（10 μM）。
2. 使用時(shí)請(qǐng)將 2×miRNA qPCR Mix 上下顛倒輕輕均勻混合，避免起泡，并
經(jīng)短暫離心后使用。如果試劑沒有混勻，其反應(yīng)性能會(huì)有所下降。
3. 按照下表組分配制熒光定量 PCR 反應(yīng)體系：
試劑組分 體積
2×miRNA qPCR Mix 25 μL
Forward Primer（自備） 1 μL
Reverse Primer 1 μL
miRNA *鏈 cDNA X μL
RNase-Free Water 至 50 μL
4. 建議反應(yīng)程序設(shè)置如下：
循環(huán) 溫度 時(shí)間
1× 95℃ 10 min
40-45×
95℃ 15 s
60℃ 1 min
溶解曲線分析 根據(jù) PCR 儀要求設(shè)定
注：本產(chǎn)品所采用的熱啟動(dòng)酶須在預(yù)變性 95℃、10 min 條件下實(shí)現(xiàn)酶的活化。
注意事項(xiàng) 1. miRNA *鏈 cDNA 的加入量不要超過 Real time PCR 體積 10%。
2. 對(duì)于特殊的檢測體系，高含量的 cDNA 模板易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，根據(jù)所
檢測 miRNA 的豐度適當(dāng)?shù)南♂?cDNA（稀釋 10 倍或者 100 倍）。
3. 2×miRNA qPCR Mix 中含有 SYBR Green I 和 ROX 染料，保存本產(chǎn)品
或配制 PCR 反應(yīng)液時(shí)應(yīng)避免強(qiáng)光照射。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 一站式柱式 miRNAOUT（CAT#:80104）