新城疫病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒新城疫（newcastle disease,ND）是由新城疫病毒引起的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病，具有很高的發(fā)病率和病死率，是危害養(yǎng)禽業(yè)的一種主要傳染病，被OIE 列為 A 類動(dòng)物傳染病。新城疫病毒為副黏病毒科禽腮腺炎病毒屬（Avulavirus）的禽
副黏病毒 I 型（APMV-1），該病毒存在于病禽的所有組織器官、體液、分泌物和排泄中，
以腦、脾、肺含毒量zui高，以骨髓含毒時(shí)間zui長。傳統(tǒng)新城疫的檢測(cè)方法如免疫熒光法、
ELISA 等操作比較繁瑣，費(fèi)時(shí)、費(fèi)力。

新城疫病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒就是專門用于新城疫病毒的快速 RT-PCR 檢
測(cè)的試劑盒，在動(dòng)物或者動(dòng)物產(chǎn)品的檢測(cè)領(lǐng)域有廣泛用途，

它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 兩管式 RT-PCR，一次 RT 反應(yīng)產(chǎn)物可以作為多次 PCR 的模板。本試劑盒提供 10 次
的 RT 反應(yīng)試劑和 50 次的 PCR 試劑。
3. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性高，引物是根據(jù)新城疫病毒 F 基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì)，適用于所
有強(qiáng)、中、弱新城疫毒株，產(chǎn)物長度為 421 bp。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
規(guī)格及成分 成 份 編號(hào) 50 次紙盒包裝
MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 (含 RI) 80206A 20 μL
RT Buffer（含 dNTP） 60906C 60 μL
PCR Mix 3.0（含染料） 90805 1.5 mL
ND 陽性對(duì)照 896897 50 μL
ND 專一性引物一（正向引物） yw896 50 μL
ND 專一性引物二（反向引物） yw897 50 μL
RNase-free 水 80403 1 mL
使用手冊(cè) 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個(gè)月。
自備試劑 樣品 RNA。
使用方法 一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）:
RNA 模板
0.01pg-500 ng
（如果丌知道濃度則用 1-10 μL）
ND 專一性引物二（反向引物） 2 μL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 12 μL
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接
作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
三、PCR（60 μL 體系）
1、在 PCR 管中加入下列成分：
成分 樣品
ND 陽性對(duì)
照
陰性對(duì)照
PCR MagicMix 3.0 30 μL 30 μL 30 μL
cDNA 樣品（上步的 RT 反應(yīng)液） 1-5 μL 無 無
ND 陽性對(duì)照 無 2 μL 無
ND 專一性引物一（正向引物） 1 μL 1 μL 1 μL
ND 專一性引物二（反向引物） 1 μL 1 μL 1 μL
補(bǔ)水到 60 μL
2、PCR 反應(yīng)參數(shù)：
過程 溫度 時(shí)間
預(yù)變性 95℃ 5 min
PCR 反應(yīng)
（40 個(gè)循環(huán)）
95℃ 30 s
50℃ 30 s
72℃ 40 s
zui后延伸 72℃ 5 min
四、電泳檢測(cè)
1、取 10-20μL PCR 產(chǎn)物直接在 PAGE 或瓊脂糖凝膠上電泳，正確的擴(kuò)增產(chǎn)物的大小為
421 bp。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 綠如藍(lán)核酸染料