小反芻獸疫病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒小反芻獸疫(Peste des Petits Ruminants, PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒屬的小反芻獸疫病毒( Peste des Petits Ruminants Virus, PPRV) 引起的急性、烈性傳染病。
它是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)法定的 A 類傳染病,我國(guó)將其定為Ⅰ類動(dòng)物疫病。

小反芻獸疫病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒就
是專門用于小反芻獸疫病毒的快速熒光 RT-PCR 檢測(cè)的試劑盒，在動(dòng)物或者動(dòng)物產(chǎn)品的
檢測(cè)領(lǐng)域有廣泛用途，

具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供病毒 RNA 模板。
2. 兩管式 RT-PCR，一次 RT 反應(yīng)產(chǎn)物可以作為多次 PCR 的模板。本試劑盒提供 5
次的 20 uL 體系的 RT 反應(yīng)試劑和 25 次的 50 uL 體系的熒光 PCR 試劑。
3. 使用 RNase H 已經(jīng)突變的 SuperMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶，減少了 RT 過(guò)程中 RNA 的降
解。
4. 使用熱啟動(dòng)的 Taq DNA 聚合酶，降低了非特異性擴(kuò)增。
5. 熒光定量檢測(cè)，所含 SYBR Green I 只與雙鏈 DNA 結(jié)合，反應(yīng)特異性強(qiáng)。適用于
不需要 ROX 做校正染料的熒光 PCR 儀。
6. 產(chǎn)品的有效線性范圍廣，定量更加準(zhǔn)確。
7. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化，特異性高，引物是根據(jù)保守的 N 基因設(shè)計(jì)，產(chǎn)物長(zhǎng)度為 1416 bp。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 25 次包裝
SuperMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 60906A 50 uL
RT Buffer（含 dNTP） 60906B 125 uL
2×熒光 PCR Mix 90408 625 uL
陽(yáng)性對(duì)照(XXng/uL) 100946 50 uL
PPR 專一引物一 YW315-1 50 uL
PPR 專一引物二 YW315-2 60 uL
RNase-free 水 80403 1 mL
使用手冊(cè) 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃避光保存，有效期為 6 個(gè)月。
自備試劑 樣品 RNA。
使用方法 一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
2、按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 uL 體系）: 
成分 用量
RNA 模板(自備) 由于一般不知病毒 RNA 濃度,用 1-10 uL 即可
PPR 專一性引物二 2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
RT Buffer(含 dNTP) 5 uL
37℃保溫 5 分鐘
SuperMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 2 uL
42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以
直接作為 PCR 模板使用，不需要純化。
三、熒光 PCR（50 uL 體系）
3、在 PCR 管中加入下列成分(注:做多少陽(yáng)性對(duì)照稀釋度由客戶自己決定。拷貝數(shù)可以
通過(guò)濃度和長(zhǎng)度計(jì)算而得。本陽(yáng)性對(duì)照長(zhǎng)度為 1416bp)：
成分 樣品管 陽(yáng)性對(duì)照(1-8 管) 陰性對(duì)照
2×qPCR Mix 25 uL 25 uL 25 uL
cDNA 樣品（上步的 RT 反應(yīng)液） 1-5 uL 無(wú) 無(wú)
陽(yáng)性對(duì)照(可以稀釋 1-8 個(gè)梯度) 無(wú) 1-8 個(gè)稀釋度 無(wú)
PPRV 專一性引物一 2 uL 2 uL 2 uL
PPRV 專一性引物二 2 uL 2 uL 2 uL
補(bǔ)水到 50 uL
4、PCR 反應(yīng)參數(shù)（以 ABI7500 熒光定量 PCR 儀為參考）：
過(guò)程 溫度 時(shí)間
預(yù)變性（此步用于活化
熱啟動(dòng) Taq 聚合酶）
95℃ 10 min
PCR 反應(yīng)
（35-40 個(gè)循環(huán)）
94℃ 1 min
55℃ 1 min
72℃ 2 min
融解曲線分析
95℃ 15 s
60℃ 1 min
95℃ 15 s
60℃ 15 s
5、 根據(jù)陽(yáng)性對(duì)照梯度的 Ct 值和濃度描出標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于計(jì)算樣品的濃度。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 小反芻獸 RT-PCR 檢測(cè)試劑盒（CAT#：11-260）