線粒體活性氧產(chǎn)生速率（ROS）熒光法公司正在熱銷的產(chǎn)品：cFn人細胞纖維連接蛋白ELISA檢測試劑盒
MEPE人細胞外基質(zhì)磷酸糖蛋白ELISA檢測試劑盒
CYP21B人細胞色素P450c21B/21-羥化酶ELISA方法
CYP21A人細胞色素P450c21A/21-羥化酶ELISA方法
CYP450人細胞色素P450ELISA檢測試劑盒

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍綠色之前均可使用。

標準品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標準液，4℃保存。

商品屬性：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研測定意義
活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等，研究表明，機體95％以上的活性氧（ROS）都來自于線粒體，其失衡所致的氧化應(yīng)激與細胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關(guān)。

正常情況下，細胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài)，細胞內(nèi)活性氧（ROS）水平維持在較低的生理范圍；在病理情況下，細胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破，細胞內(nèi)活性氧水平過多，就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸，使機體出現(xiàn)氧化應(yīng)激，同時，活性氧還可攻擊線粒體DNA產(chǎn)生氧化損傷，導(dǎo)致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結(jié)構(gòu)和功能變化。

因此，通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測定原理：

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜，在線粒體內(nèi)被酯酶水解，形成無熒光的DCFH，DCFH迅速與ROS反應(yīng)生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據(jù)上述原理設(shè)計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產(chǎn)生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數(shù)據(jù)點擬合，線性回歸直線斜率與ROS產(chǎn)生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品：

多功能酶標儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，4℃、8000g離心10min，取上清液待測。

2. 細菌或細胞：按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測。

3. 血液可直接測定，或者適當稀釋后測定。

測定步驟：

1. 分光光度計/酶標儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到510 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。

3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A空白管。

4. 標準管：取EP管，加入4μL標準品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A標準管。

5. 對照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

6. 測定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測定吸光度，記為A測定管。

其中標準管和空白管只需做一管，測定管和對照管每個樣均需做。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

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