大鼠骨髓間充質(zhì)干原代細胞

大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSC）分離自骨髓；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細菌、病毒等；某些淋巴細胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細胞增多，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細胞是一種除造血干細胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞。在骨髓中，BMSC占骨髓有核細胞總數(shù)的0.001%-0.1%，含量極低。骨髓間充質(zhì)干細胞的體外培養(yǎng)條件要求較高，在培養(yǎng)過程中，受貼壁時間、種植密度、血清含量、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。

產(chǎn)品名稱：大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞

組織來源：骨髓

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠骨髓間充質(zhì)干采用沖洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠骨髓間充質(zhì)干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

小鼠肝細胞生長因子受體(HGFR/ c-MET)試劑盒

Human varicella zoster virus IgG (VZV-IgG) ELISA Kit 人水痘帶狀皰疹病毒IgG(VZV-IgG)試劑盒

HumanAi-ThrombinⅢ,AT-ⅢELISAKit 人抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanai-ophoblastaibody,ATA試劑盒人抗滋養(yǎng)膜細胞抗體(ATA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物氧化應(yīng)激活性氧(ROS)比色法定量試劑盒(超氧陰離子)20次

Humanansferfactor，TFELISAKit人轉(zhuǎn)移因子(TF)試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬催乳素(PRL)試劑盒

Human macrophage chemotatic factor (MCF) ELISA Kit 人巨噬細胞趨化因子(MCF)試劑盒

Porcinemyeloperoxidase,MPOELISAKit 豬髓過氧化物酶(MPO)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAlpha1-AGP(HumanAlpha1-Acidglycoprotein)ELISAKit人α1酸性糖蛋白

血液0酸二酯酶2(PDE2)活性熒光定量試劑盒10次

Mouseβ2-glycoprotein1aibodyIgA/G/M,β2-GP1IgA/G/MELISAKit小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1IgA/G/M)試劑盒

人粘蛋白5AC(MUC5AC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human MUC5AC (Mucin 5 Subtype AC) ELISA Kit

人粘蛋白5B(MUC5B)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human MUC5B (Mucin 5 Subtype B) ELISA Kit

人粘蛋白7(MUC7)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human MUC7 (Mucin 7) ELISA Kit

人粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human MEC/CCL28 (Mucosae Associated Epithelia Chemokine) ELISA Kit

IL25重組人 IL25 蛋白 (Fc 標簽) Protein

衰變加速因子(DAF)重組蛋白 Recombinant Decay Accelerating Factor (DAF)

EIF5A重組人 EIF5A 蛋白 Protein

IL1RL1 Protein Human 重組人 IL1RL1 / ST2 蛋白

HA Protein H4N6 重組甲型流感 H4N6 (A/mallard/Ohio/657/2002) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白

BRL細胞，肝細胞 人前列腺癌細胞,9L-E細胞 人上皮細胞RNAHMEpiC miRNA5 μg  YAC-1(小鼠淋巴瘤細胞)     RL95-2, 人子宮內(nèi)膜腺癌細胞系 羊膜細胞,H.A.細胞 WERI-Rb-1(人視網(wǎng)膜母細胞瘤)  EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KM0501 羊原代附睪上皮細胞 兔原代乳腺導管上皮細胞

大鼠骨髓間充質(zhì)干原代細胞饑餓素-O-乙?；D(zhuǎn)移酶(GOAT)重組蛋白 Recombinant Ghrelin-O-Acyltransferase (GOAT)

AIM2 Protein Human 重組人 AIM2 蛋白 (GST 標簽)

OPCML重組小鼠 OBCAM / OPCML 蛋白 (His 標簽) Protein

CX3CL1 Protein Canine 重組狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白

IL12A & IL27B重組人 IL12A & IL27B Heterodimer 蛋白 Protein