詳細(xì)介紹
大鼠骨髓樹(shù)突狀原代細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)
大鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞分離自骨髓;骨髓是機(jī)體的造血組織,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用,白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細(xì)菌、病毒等;某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓。出生時(shí),紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,脂肪細(xì)胞增多,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細(xì)胞是由骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的;樹(shù)突狀細(xì)胞分為成熟樹(shù)突狀細(xì)胞和未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞,典型的未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞呈半貼壁生長(zhǎng),在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則,表面皺褶多,亦可見(jiàn)少量短刺狀突,胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見(jiàn)吞噬泡,具有較強(qiáng)的遷移能力,伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞,貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹(shù)突狀細(xì)胞由未成熟DC進(jìn)一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導(dǎo)而成,多數(shù)呈懸浮生長(zhǎng), 細(xì)胞呈圓形,細(xì)胞體積進(jìn)一步增大,表面大量粗細(xì)不等的樹(shù)枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ),伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞。未成熟DC細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細(xì)胞尚無(wú)特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志,主要通過(guò)形態(tài)學(xué)、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。其中成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子,進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答,處于啟動(dòng)、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié);未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力,但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答,不能激活T細(xì)胞的第二信號(hào),可導(dǎo)致T細(xì)胞無(wú)能,從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低,一般在30%以下。
英文名稱 | Rat Bone Marrow Maturation Dendritic Cells | 組織來(lái)源 | 骨髓 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8232 |
細(xì)胞形態(tài) | 圓形,樹(shù)突狀 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱:大鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)
組織來(lái)源:骨髓
產(chǎn)品規(guī)格:5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基:含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:半貼壁半懸浮
細(xì)胞形態(tài):圓形,樹(shù)突狀
傳代特性:屬于高度分化細(xì)胞;屬于不增殖細(xì)胞群
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
大鼠骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓成熟DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞、培養(yǎng)過(guò)程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠骨髓樹(shù)突狀經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細(xì)胞形態(tài)等綜合鑒定,純度可達(dá)80%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,細(xì)胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
小鼠白介素23(IL-23)ELISA 試劑盒
People deoxidizing urine three phosphoric acid (DP) ELISA Kit 人脫氧尿三0酸(DP)試劑盒
HumanCalcitonin,CTELISAKit 人降鈣素(CT)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humancarcinoembryonicaign,CEA試劑盒人癌胚抗原(CEA/CD66)試劑盒規(guī)格:96T/48T
重組腺病毒效價(jià)比色法定量試劑盒50次
HumansolubleClusterofdiffereiation86,sCD86ELISAKit人可溶性CD86(B7-2/sCD86)試劑盒規(guī)格:96T/48T
豚鼠環(huán)0酸腺苷(cAMP)試劑盒 ,英文名: cAMP ELISA Kit
Human azidothymidine (AZT) ELISA Kit 人(AZT)試劑盒
MonkeyapoproteinA1,apo-A1ELISAKit 猴載脂蛋白A1(apo-A1)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforbFGF-4(Humanbasicfibroblastgrowthfactor4)ELISAKit人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4
細(xì)菌乳糖酵解溴百里酚藍(lán)(BTB)瓊脂平板50個(gè)
RabbitIerleukin1β,IL-1βELISAKit兔子白介素1β(IL-1β)試劑盒規(guī)格:96T/48T
豬Ⅲ型膠原試劑盒 豬Ⅲ型膠原試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 豬Ⅲ型膠原試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:豬Ⅲ型膠原試劑盒、豬Ⅲ型膠原eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
植物B6試劑盒 植物B6試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 植物B6試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:植物B6試劑盒、植物B6eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
植物B12試劑盒 植物B12試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 植物B12試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:植物B12試劑盒、植物B12eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
植物激素脫落酸試劑盒 植物激素脫落酸試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 植物激素脫落酸試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來(lái)源:試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:植物激素脫落酸試劑盒、植物激素脫落酸eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
ANGPTL4重組小鼠 ANGPTL4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
基質(zhì)金屬蛋白酶26(MMP26)重組蛋白 Recombinant Matrix Metalloproteinase 26 (MMP26)
SIGLEC6重組人 SIGLEC6 / CD327 蛋白 Protein
ACVR2A Protein Human 重組人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 蛋白 (His 標(biāo)簽)
IL12B Protein Marmoset 重組絨猴 IL12B / IL-12B 蛋白
BxPC-3細(xì)胞,人原位胰腺腺癌細(xì)胞 人皮膚纖維微細(xì)胞系,Malmc細(xì)胞 小鼠漿細(xì)胞瘤;MPC-11 原代平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑Many types of cells包裝:5/2.5/1ml Raji細(xì)胞,Butt's 淋巴瘤細(xì)胞 卵巢癌細(xì)胞,L1細(xì)胞 羊原代肺成纖維細(xì)胞 小鼠原代骨髓肥大細(xì)胞
大鼠骨髓樹(shù)突狀原代細(xì)胞(成熟DC細(xì)胞)CD4分子(CD4)重組蛋白 Recombinant Cluster Of Differentiation 4 (CD4)
IRAK4 Protein Human 重組人 IRAK4 / IRAK-4 蛋白
CD33重組小鼠 CD33 / Siglec-3 蛋白 Protein
FAS Protein Rat 重組大鼠 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 蛋白
MSLN重組人 MSLN / Mesothelin 蛋白 (aa 296-580, Fc 標(biāo)簽) Protein