大鼠骺軟骨原代細胞

大鼠骺軟骨細胞分離自骨骺生長板；骨骺生長板位于長骨兩端骨骺和骨干之間的軟骨組織，其中的骺軟骨細胞可分裂、成熟、肥大，最終被骨組織所替換，對于長骨生長具有重要作用。幼稚的骺軟骨細胞位于軟骨組織的表層，單個分布、體積較小、呈橢圓形，長軸與軟骨表面平行，越向深層的骺軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形，染色淺，細胞質(zhì)弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴。成熟的骺軟骨細胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內(nèi)，這些骺軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群。電鏡下，骺軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質(zhì)內(nèi)有大量的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復合體及少量的線粒體。在組織切片中，骺軟骨細胞收縮為不規(guī)則形，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的骺軟骨細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

產(chǎn)品名稱：大鼠骺軟骨細胞

組織來源：生長板組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每3-4天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠骺軟骨采用膠原酶-蛋白酶聯(lián)合消化并軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠骺軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA 試劑盒

Rat aquaporin 4 (AQP-4) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)試劑盒

Humanplacealprotein,PPELISAKit 人胎盤蛋白(PP)試劑盒 進口分裝

HumancicaicialPemphigoid,CP試劑盒人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)試劑盒

組(leucine)含量比色法定量試劑盒20次

humanS100calciumbindingproteinA9/calgranulinB,S100A9ELISAKit人S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)試劑盒

魚免疫球蛋白M(IgM)試劑盒

Human collagen aoaibody (CLA) ELISA Kit 人抗膠原蛋白抗體(CLA)試劑盒

PorcineAngiopoietin2,ANG-2ELISAKit 豬血管生成素2(ANG-2)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforADRA1A(Mouseadrenergicalpha-1Areceptor)ELISAKit小鼠能a1A受體

血液乙醇脫氫酶IV活性比色法定量試劑盒20次

MouseSolubleClusterofdiffereiation30ligand,sCD30LELISAKit小鼠可溶性CD30配體(sCD30L)試劑盒

豬白介素1(IL-1)ELISAKit   ELISA. 

豬Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISAKit   ELISA. 

豬Ⅲ型膠原(ColⅢ)ELISAKit   ELISA. 

豬細胞間粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISAKit   ELISA.

THPO重組小鼠 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 標簽) Protein

ChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2 0.5mgChRM2 (Muscarinic Acetylcholine receptor M2) 毒蕈堿型乙酰受體M2(抗原)

ELK1重組人 ELK1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

AK2 Protein Human 重組人 AK2 / Adenylate kinase 2 蛋白 (His & GST 標簽)

FGFR4 Protein Mouse 重組小鼠 FGFR4 / CD334 蛋白 (His & Fc 標簽)

CA12 Others Human 人 CA12 人細胞裂解液   真皮成纖維細胞Many   CD7 Others Human 人 CD7 人細胞裂解液   IGFBP5 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IGFBP5 / IGFBP-5 蛋白 (His 標簽) 小鼠原代子宮成纖維細胞 大鼠原代子宮內(nèi)膜上皮細胞

大鼠骺軟骨原代細胞胰淀素(IAPP)重組蛋白 Recombinant Islet Amyloid Polypeptide (IAPP)

ACVRL1 Protein Human 重組人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His 標簽)

TFPI重組人 TFPI 蛋白 (His 標簽) Protein

M. VIRIDIFACIENS NA Protein M.viridifaciens 重組綠色小單孢菌 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) (His 標簽)

HA重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽) Protein