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詳細(xì)介紹
大鼠口腔黏膜成纖維原代細(xì)胞
大鼠口腔黏膜成纖維細(xì)胞分離自口腔黏膜組織；口腔(oral cavity)是消化道的起始部分。前借口裂與外界相通，后經(jīng)咽峽與咽相續(xù)?？谇粌?nèi)有牙、舌等器官?？谇坏那氨跒榇?、側(cè)壁為頰、頂為腭、口腔底為黏膜和肌等結(jié)構(gòu)?？谇唤枭稀⑾卵拦譃榍巴鈧?cè)部的口腔前庭(oral vestibule)和后內(nèi)側(cè)部的固有口腔(oral cavity proper)；當(dāng)上、下頜牙咬合時(shí)，口腔前庭與固有口腔之間可借第三磨牙后方的間隙相通。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
英文名稱 | Rat Oral Mucosal Fibroblast Cells | 組織來源 | 口腔黏膜 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號(hào) | YS-01X8239 |
細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：大鼠口腔黏膜成纖維細(xì)胞
組織來源：口腔黏膜
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
大鼠口腔黏膜成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
方法簡(jiǎn)介
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠口腔黏膜成纖維采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠口腔黏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
兔子胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA 試劑盒
Rat angiopoietin 1 (ANG-1) ELISA Kit 大鼠血管生成素1(ANG-1)試劑盒
Humaheumatoidfactor,RFELISAKit 人類風(fēng)濕因子(RF)試劑盒 進(jìn)口分裝
HumancytosolicphospholipaseA2,cPLA2試劑盒人胞漿型0脂酶A2(cPLA2)試劑盒
組織IGF-1R激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
Humanplateletactivatingfactor，PAFELISAKit人血小板活化因子(PAF)試劑盒
小鼠胃泌素(GT)試劑盒 96T/48T
Human phospholipase A2 (PL-A2) ELISA Kit 人0脂酶A2(PL-A2)試劑盒
HumanAmylaseELISAKit 人(Amylase)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
ChickenIerleukin17,IL-17試劑盒雞白介素17(IL-17)試劑盒規(guī)格：96T/48T
載玻片細(xì)胞FSH-BETA蛋白表達(dá)熒光顯微鏡試劑盒10/20次
MouseGlycogenphosphorylaseII,GP-IIELISAKit小鼠糖原0酸化酶同工酶II(GP-II)試劑盒規(guī)格：96T/48T
人多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISAKit ELISA.
人葡萄糖激酶(GCK)ELISAKit ELISA.
人單胺氧化酶(MAO)ELISAKit ELISA.
CD86重組大鼠 CD86 / B7-2 蛋白 Protein
HIV gp120 艾滋病病毒(抗原 0.5mgHIV gp120 艾滋病病毒(抗原)
HSPD1重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
IL27 Protein Human 重組人 IL27 / Interleukin-27 蛋白
HDAC8 Protein Mouse 重組小鼠 HDAC8 / HDACL1 蛋白
CDH2 Others Human 人 N-Cadherin / CD325 / CDH2 人細(xì)胞裂解液 CHO(倉鼠細(xì)胞) 人間充質(zhì)干細(xì)胞-肝 中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E1 人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞;NCI-H1975 MFC 小鼠胃癌細(xì)胞 小鼠原代牙齦上皮細(xì)胞 人原代椎體終板軟骨細(xì)胞
大鼠口腔黏膜成纖維原代細(xì)胞胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP3)重組蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor Binding Protein 3 (IGFBP3)
CDH12 Protein Human 重組人 Cadherin-12 / CDH12 蛋白
FCN1重組人 Ficolin-1 / Ficolin-A / FCN1 蛋白 Protein
FABI Protein E. coli 重組大腸桿菌 Enoyl-ACP Reductase / FABI 蛋白
HA重組甲型流感 H1N3 (A/duck/NZL/160/1976) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
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