大鼠毛囊干原代細胞

大鼠毛囊干細胞分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭，中心是一根毛發(fā)，立毛肌的一側斜附在毛囊壁上，附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度，它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個結構比較復雜的器官附件組織。毛囊干細胞是在毛囊外根鞘隆突部中的一種細胞。毛囊干細胞屬于成體干細胞，在體內處于靜止狀態(tài)，在體外培養(yǎng)作用下表現(xiàn)出驚人的增殖能力。研究發(fā)現(xiàn)，毛囊干細胞具有多向分化潛能，它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺，參與皮膚創(chuàng)傷愈合的過程。毛囊干細胞和其它成體干細胞一樣，具有慢周期性、未分化性、自我更新和體外增殖能力強等特點。毛囊干細胞分化經毛囊干細胞（hair follicle stem cells，FSC）、短暫增殖細胞（transit amplifying cells，TAC）有絲分裂后分化細胞（postmitotic differentiating cells，PDC）三個階段。毛囊干細胞在光鏡下呈立方形，細胞體積小，核漿比率大，表面光滑，皺褶少，又被稱為非鋸齒形細胞，細胞體積的增大與增殖能力呈負相關。超微結構顯示細胞表面有少許微絨毛，細胞核存在許多卷曲，染色質彌散分布，這些形態(tài)特征均表現(xiàn)出原始細胞的特性。

產品名稱：大鼠毛囊干細胞

組織來源：毛囊

產品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠毛囊干細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介

實驗室分離的大鼠毛囊干采用膠原酶 - 蛋白酶聯(lián)合消化制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的大鼠毛囊干經CD34免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

兔子表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒

Human vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 人血管內皮細胞生長因子受體2(VEGFR-2)試劑盒

HumanVisceraladipose-specificserineproteaseinhibitor,vaspinELISAKit 人內臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanEsadiol,E2試劑盒人雌二醇(E2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織SPHK1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次

HumanorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISAKit人孤腓肽(OFQ/N)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠A(VA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat osteonectin (ON) ELISA Kit 大鼠骨粘連蛋白(ON)試劑盒

HumanCCAAT/enhancerbindingproteinalpha,C/EBPαELISAKit 人CCAAT增強子結合蛋白α(C/EBPα)試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenLeinizingHormone,LH試劑盒雞促黃體激素(LH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞NFKAPPABP50蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次

MouseFreei-iodothyronineIndes,Free-T3ELISAKit小鼠游離三甲狀腺原(Free-T3)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人轉錄激活因子4(ATF4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human ATF4 (Activating anscription Factor 4) ELISA Kit

人轉錄激活因子6(ATF6)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human ATF6 (Activating anscription Factor 6) ELISA Kit

人腺苷三0酸結合盒轉運體G1(ABCG1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human ABCG1 (ATP Binding Cassette anspoer G1) ELISA Kit

人腺苷三0酸結合盒轉運體A1(ABCA1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒   Human ABCA1(ATP Binding Cassette anspoer A1) ELISA Kit

ERBB3重組人 HER3 / ErbB3 蛋白  Protein

三葉因子1(TFF1)重組蛋白 Recombinant Trefoil Factor 1 (TFF1)

DHRS9重組人 DHRS9 蛋白 (His 標簽) Protein

ADH7 Protein Human 重組人 CAMK2A / CAMKA 蛋白 (GST 標簽)

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA2 (Hemagglutinin) 蛋白

CL-0137NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Sain L](小鼠成纖維  小鼠表皮角質形成細胞   IL5RA Others Mouse 小鼠 IL5Ra / CD125 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液   MST1R Others Human 小鼠原代心肌成纖維細胞 人原代晶狀體上皮細胞

大鼠毛囊干原代細胞AR (Androgen Receptor 0.5mgAR (Androgen Receptor)peptide 雄激素受體(多肽抗原)

IL24 Protein Human 重組人 IL-24 / MDA-7 蛋白

ACHE重組小鼠 Acetylcholinesterase / ACHE 蛋白 Protein

VEGFC Protein Rat 重組大鼠 VEGFC / VEGF-C 蛋白 (aa 108-223, Fc 標簽)

ERBB4重組人 / 恒河猴 HER4 / ErbB4 蛋白 (Fc 標簽) Protein