大鼠腦微血管周原代細胞公司出售的產(chǎn)品：人原代腦微血管內(nèi)皮細胞 NG108-15(小鼠神經(jīng)細胞瘤與大鼠神經(jīng)膠質(zhì)瘤之融合細胞) HUV-EC-C 人臍靜脈內(nèi)皮細胞 1ml/T75 KYSE450 人食管癌細胞 DU 145 人前列腺癌細胞 兔原代羊膜間質(zhì)細胞

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細胞屬性：

方法簡介

公司實驗室分離的大鼠腦微血管周采用蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠腦微血管周經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

 

細胞簡介：

大鼠腦微血管周細胞分離自腦微血管；大腦分左右兩個半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。每一個半球都有三個面，即外側(cè)面（約占整個皮質(zhì)面積的1/3）、內(nèi)側(cè)面和底面（占2/3的面積）；半球表面有很多深淺不等的溝或裂，溝或裂之間的隆起叫回，它們大大增加了大腦的表面積；大腦外側(cè)面重要的溝、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝。由于三溝裂之界隔，使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉、顳葉、枕葉四大部分。周細胞（pericyte）又稱Rouget細胞和壁細胞，是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞，可以收縮。周細胞嵌入毛細血管內(nèi)皮細胞的基膜中，通過物理接觸和旁分泌信號與內(nèi)皮細胞進行細胞通訊，監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細胞的成熟過程。此外，周細胞還具有調(diào)控毛細血管血流量、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用，其多功能性是目前研究的熱點之一，所以對血管周細胞的生物學特征、標記物、細胞功能等的研究都為相關研究提供基礎資料。周細胞產(chǎn)生手指狀的外延以調(diào)控毛細血管的血流量。周細胞和內(nèi)皮細胞之間共同擁有一個基膜，基膜上有多種細胞連接，包括多種整合素、神經(jīng)鈣黏素、纖連蛋白以及接合素。它還參與毛細血管直徑的雙向調(diào)控；毛細血管受損時，周細胞還可增殖，分化為內(nèi)皮細胞和成纖維細胞。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作步驟：

1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。

2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。

3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。

4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。

5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。

6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。

7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。

8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。

9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。

10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。

11. 鏡檢觀察。

公司產(chǎn)品：