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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的大鼠膀胱成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的大鼠膀胱成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠膀胱成纖維原代細胞 | 組織來源 | 膀胱組織 |
英文名稱 | Rat Bladder Fibroblast Cells | 貨號 | YS-01X7251 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
大鼠膀胱成纖維細胞分離自膀胱組織；膀胱是一個儲尿器官，在哺乳類動物，它是由平滑肌組成的一個囊形結(jié)構(gòu)，位于骨盆內(nèi)，其后端開口與尿道相通。膀胱與尿道的交界處有括約肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三層組織組成，由內(nèi)向外為黏膜層、肌層和外膜。肌層由平滑肌纖維構(gòu)成，稱為逼尿肌，逼尿肌收縮，可使膀胱內(nèi)壓升高，壓迫尿液由尿道排出。在膀胱與尿道交界處有較厚的環(huán)形肌，形成尿道內(nèi)括約肌。在括約肌收縮能關(guān)閉尿道內(nèi)口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分為三層：即漿膜層（蜂窩脂肪組織）、肌肉層（逼尿肌、膀胱三角區(qū)?。┖宛つ樱O薄的一層移行上皮組織）。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的膀胱成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。膀胱成纖維細胞分泌的生長因子是一種具有多功能的促有絲分裂原，研究已表明其參與惡性腫瘤的形成過程。近年來，堿性成纖維細胞生長因子在膀胱癌發(fā)病過程中的作用、與生物學(xué)行為之間的關(guān)系以及治療上的應(yīng)用已受到重視。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
山羊白介素10(IL-10)ELISA 試劑盒
Rat apolipoprotein A1 (apo-A1) ELISA Kit 大鼠載脂蛋白A1(apo-A1)試劑盒
HumanGlathioneperoxidase,GSH-PxELISAKit 人過氧化酶(GSH-Px)試劑盒 進口分裝
Humanheatshockprotein27,HSP-27試劑盒人熱休克蛋白27(HSP-27)試劑盒
組織輔酶Q含量比色法定量試劑盒20次
Humanmaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)試劑盒
小鼠細胞膜表面免疫球蛋白(SmIg)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human lymphocyte factor ELISA Kit 人淋巴細胞因子試劑盒
Humanα-enolaseELISAKit 人α烯醇化酶(α-enolase)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Chickeninfectiouscoryza,ic試劑盒雞傳染性鼻抗體(IC)試劑盒規(guī)格：96T/48T
載玻片細胞CYTOCHROMEC蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次
MousegranzymesB,Gzms-BELISAKit小鼠顆粒酶B(Gzms-B)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物鈣調(diào)素試劑盒 植物鈣調(diào)素試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 植物鈣調(diào)素試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：植物鈣調(diào)素試劑盒、植物鈣調(diào)素試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶活性試劑盒 γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶活性試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶活性試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶活性試劑盒、γ-谷酰轉(zhuǎn)肽酶活性試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
植物D3試劑盒 植物D3試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 植物D3試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：植物D3試劑盒、植物D3 試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
人1,3-二0酸甘油酸試劑盒 人1,3-二0酸甘油酸試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 人1,3-二0酸甘油酸試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人1,3-二0酸甘油酸試劑盒、人1,3-二0酸甘油酸試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。
TFPI2重組小鼠 TFPI2 / PP5 蛋白 Protein
FK506結(jié)合蛋白樣蛋白(FKBPL)重組蛋白 Recombinant FK506 Binding Protein Like Protein (FKBPL)
FKBP7重組人 PPIase / FKBP7 蛋白 Protein
IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白
ERBB2 Protein Rat 重組大鼠 HER2 / ErbB2 蛋白
CL-0343HA(人羊膜細胞) HL-60(人早幼粒急性白血病細胞) ENPEP Others Mouse 小鼠 ENPEP / Aminopeptidase A 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 IL12A & IL12B Others Human 人 IL12A & IL12B Heterodimer 小鼠原代胃成纖維細胞 兔原代食管上皮細胞
大鼠膀胱成纖維原代細胞FSH(Follicle-stimulating hormone precursor 0.5mgFSH(Follicle-stimulating hormone precursor) 促卵泡刺激素抗原
AMPK Protein Human 重組人 AMPK (G1/B1/A1) Heterotrimer 蛋白
CD38重組大鼠 SCARB3 蛋白 Protein
SPARC Protein Mouse 重組小鼠 Osteonectin / SPARC 蛋白 (His 標簽)
CAMK2B重組人 CAMK2B / CaMKII-beta 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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