大鼠外周血單核原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代腹膜間皮細(xì)胞 LS 180(人結(jié)腸腺癌細(xì)胞) HBL-100 人整合SV40基因的上皮細(xì)胞 1ml/T75 Mv 1 lu 貂肺上皮細(xì)胞 JM 人急性T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 人原代小膠質(zhì)細(xì)胞

大鼠外周血單核原代細(xì)胞

大鼠外周血單核細(xì)胞分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細(xì)胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細(xì)胞，我們把這樣得到的干細(xì)胞稱為外周血干細(xì)胞，在二十一世紀(jì)初人類開始的生命方舟計(jì)劃中提出外周血這一新概念。單核細(xì)胞起源于骨髓中的造血干細(xì)胞，并在骨髓中發(fā)育。當(dāng)它們從骨髓進(jìn)入血液時(shí)仍然是尚未成熟的細(xì)胞。與其他血細(xì)胞比較，單核細(xì)胞內(nèi)含有更多的非特異性脂酶，并且具有更強(qiáng)的吞噬作用。單核細(xì)胞在血液中停留2-3天后遷移到周圍組織中，細(xì)胞體積繼續(xù)增大，直徑可達(dá)50-80μm，細(xì)胞內(nèi)所含的溶酶體顆粒和線粒體的數(shù)目也增多，成為成熟的細(xì)胞。固定在組織中的單核細(xì)胞稱為組織巨噬細(xì)胞，它們經(jīng)常大量存在于淋巴結(jié)、肺泡壁、骨髓、肝和脾等器官。激活了的單核細(xì)胞和組織巨噬細(xì)胞能生成并釋放多種細(xì)胞毒、干擾素和白細(xì)胞介素，參與機(jī)體防衛(wèi)機(jī)制，還產(chǎn)生一些能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)的因子。在炎癥周圍單核細(xì)胞能進(jìn)行細(xì)胞分裂，并包圍異物。

產(chǎn)品名稱：大鼠外周血單核細(xì)胞

組織來(lái)源：外周血

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 半貼壁半懸浮

細(xì)胞形態(tài) 圓形、巨噬細(xì)胞樣

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

方法簡(jiǎn)介

普諾賽實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠外周血單核采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

普諾賽實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠外周血單核經(jīng)CD14免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

大鼠中期因子(MK)試劑盒 ，英文名： MK ELISA Kit

Mouse soluble myosin heavy chain 1 (sMHC-1) ELISA Kit 小鼠可溶性肌球蛋白重鏈1(sMHC-1)試劑盒

MouseFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit 小鼠FMS樣酪激酶3(Flt3)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanH-rasELISAKit人H-ras

B1熒光定量試劑盒20次

ELISAKitCav-1大鼠窖蛋白Caveolin1

小鼠膀胱抗原(BTA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat noradrenaline (NA) ELISA Kit 大鼠去甲(NA)試劑盒

Humanurokinase-typeplasminogenactivator,uPA/PLAUELISAKit 人型纖溶酶原激活物(uPA/PLAU)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanbreastcancersusceptibilityprotein2,BRCA-2試劑盒人癌易感蛋白2(BRCA-2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物組織線粒體超氧化物歧化酶(Mn/FeSOD)分離試劑盒50次

Humansorbitoldehydrogenase,SDHELISAKit人脫氫酶(SDH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor receptor 2   規(guī)格：      英文縮寫：   VEGF-R2

血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體3   英文名稱：   vascuiar endothelial growth factor receptor 3   規(guī)格：      英文縮寫：   VEGF-R3

血管活性腸肽   英文名稱：   vasoactine inestinal peptide   規(guī)格：      英文縮寫：   VIP

內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素   英文名稱：   Visfatin   規(guī)格：      英文縮寫：   Visfatin

EPHA3重組小鼠 EphA3 蛋白 (aa 569-984) Protein

甲狀旁腺激素(PTH)重組蛋白 Recombinant Parathyroid Hormone (PTH)

CPLX3重組人 CPLX3 / Complexin 3 蛋白 Protein

EGFL7 Protein Human 重組人 EGFL7 / VE-statin 蛋白

IL1B Protein Canine 重組狗 IL-1 beta / IL1B 蛋白

DDR2 Others Mouse 小鼠 DDR2 Kinase / CD167b 人細(xì)胞裂解液   人角膜成纖維細(xì)胞 (HcorF) SERPINF1 Others Human 人 SerpinF1 / SERPINF1 / PEDF 人細(xì)胞裂解液   NCI-H596(人肺腺鱗癌細(xì)胞) 小鼠原代腦微血管周細(xì)胞 人原代下腔靜脈外膜成纖維細(xì)胞

大鼠外周血單核原代細(xì)胞鈣結(jié)合蛋白(CR)重組蛋白 Recombinant Calretinin (CR)

CSNK1A1 Protein Human 重組人 CSNK1A1 / CKI-alpha / CK1 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

PTPRC重組小鼠 CD45 / PTPRC 蛋白 (aa 453-1152, His & GST 標(biāo)簽) Protein

IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白

CRIPT重組人 CRIPT / cysteine-rich PDZ-binding 蛋白 Protein

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。