大鼠小氣道平滑肌原代細(xì)胞公司出售的產(chǎn)品：小鼠原代晶狀體上皮細(xì)胞 MV3(人黑色素瘤細(xì)胞) BJ 人皮膚成纖維細(xì)胞 1ml/T75 4T1 小鼠癌細(xì)胞 C6/36 白紋伊蚊細(xì)胞 人原代膀胱成纖維細(xì)胞

大鼠小氣道平滑肌原代細(xì)胞

大鼠小氣道平滑肌細(xì)胞分離自小氣道組織；臨床上通常將內(nèi)徑小于2mm的小細(xì)支氣管稱為小氣道。小氣道具有氣流阻力小，但易阻塞的特點(diǎn)。在平靜吸氣時(shí)，空氣進(jìn)入狹窄的鼻咽部，產(chǎn)生渦流。由于小氣道已無軟骨支持，在脫離纖維鞘嵌入肺組織后，管腔通暢性不象軟骨性氣道，易于受胸腔的壓力變化的影響。小氣道上皮細(xì)胞形成連續(xù)呼吸道內(nèi)層，作為隔絕外界有害物質(zhì)的物理和功能屏障發(fā)揮著的作用。小氣道位于肺泡和氣管的交界處，這些細(xì)胞在功能上能夠調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)、產(chǎn)生化學(xué)因子進(jìn)行宿主防御、表達(dá)粘附分子，并可能通過HLA-DR表達(dá)呈遞抗原；它們還能產(chǎn)生液體有助于肺液的平衡。許多呼吸道疾病，如哮喘、支氣管炎、慢性阻塞性肺病和囊性纖維化，都涉及呼吸道表面上皮細(xì)胞的破壞；小氣道上皮細(xì)胞的培養(yǎng)可為防止呼吸道擴(kuò)增疾病和重塑提供新的治療選擇。小氣道平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。小氣道的生理功能特點(diǎn)：①小氣道阻力小；②氣流速度慢；③可調(diào)節(jié)控制通氣與血流比例。小氣管平滑肌細(xì)胞主要功能：①保持氣道張力維持小氣道形態(tài)；②肺小氣道進(jìn)行氣體交換，病變可引起換氣功能障礙；③炎癥、痰液阻塞或當(dāng)氣道外壓大于氣道內(nèi)壓時(shí)容易造成小氣道閉合、萎陷。小氣管平滑肌細(xì)胞與主要病生理變化：①支氣管炎；②肺氣腫；③慢性阻塞性肺疾病。

產(chǎn)品名稱：大鼠小氣道平滑肌細(xì)胞

組織來源：小氣道

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠小氣道平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠小氣道平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠小氣道平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

大鼠載脂蛋白A2(APOA2)試劑盒 ，英文名： APOA2 ELISA Kit

Mouse thioredoxin (x) ELISA Kit 小鼠硫氧化還原蛋白(x)試劑盒

MouseMacrophageInflammatoryProtein1α,MIP-1αELISAkit 小鼠巨噬細(xì)胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanFactorVIII-relatedAigen,FVIIIAgELISAKit人第八因子相關(guān)抗原

細(xì)胞/組織基因組/線粒體DNA同步萃取試劑盒10/20次

ELISAKitMMP-鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10

小鼠二0酸腺苷(ADP)ELISA 試劑盒

Rat endostatin (ES) ELISA Kit 大鼠內(nèi)皮抑素(ES)試劑盒

HumanactivatedcoagulationfactorⅫ,FⅫaELISAKit 人活化Ⅻ(FⅫa)試劑盒 進(jìn)口分裝

Humanapoptosissignalregulatingkinase1,ASK-1試劑盒人凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)試劑盒

植物乙醇酸氧化酶(glycolateoxidase)活性比色法定量試劑盒20次

Humaissueinhibitorsofmetalloproteinase2，TIMP-2ELISAKit人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)試劑盒

兔白介素-18(rabbit IL-18)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔免疫球蛋白G(rabbit IgG)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔免疫球蛋白M(rabbit IgM)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

兔免疫球蛋白E(rabbit IgE)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

NA重組甲型流感 H9N2 酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) Protein

pre-X protein(CT 0.5mgpre-X protein(CT)[Hepatitis B virus C-Terminus] 乙肝病毒pre-X蛋白抗原(C端)

TNFRSF1A重組人 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

FGF7 Protein Human 重組人 FGF7 / FGF-7 / KGF 蛋白 (His 標(biāo)簽)

DPP4 Protein Human 重組人 DPP4 / DPPIV / CD26 蛋白

EFNA4 Protein Mouse 重組小鼠 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)(Fc 標(biāo)簽)  OK(負(fù)鼠小管細(xì)胞)     中國倉鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO Hu 164 SCF 17  小鼠肝癌細(xì)胞;Hepa 1-6 [Hepa1-6] 小鼠胰腺星狀細(xì)胞 小鼠原代頸動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 兔原代淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞

大鼠小氣道平滑肌原代細(xì)胞鈣非依賴性0脂酶A2(iPLA2)重組蛋白 Recombinant Phospholipase A2, Calcium Independent (iPLA2)

DAPK3 Protein Human 重組人 DAPK3 / ZIPK 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

PREP重組小鼠 Prolyl endopeptidase / PREP 蛋白 Protein

CXCL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CXCL13 / BCA-1 / BLC 蛋白

MAP1LC3B重組人 LC3B / MAP1LC3B 蛋白 Protein