大鼠真皮毛乳頭原代細胞

大鼠真皮毛乳頭細胞分離自皮膚毛囊組織；毛囊是表皮細胞連續(xù)形成的袋樣上皮。其基底是真皮凹進的真皮毛乳頭，中心是一根毛發(fā)，立毛肌的一側(cè)斜附在毛囊壁上，附著點的上方為皮脂腺通入毛囊的短頸，毛囊在皮膚表面的開口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下組織中，毛囊向下伸入真皮約有一厘米深度，它是由包繞毛發(fā)與表皮相連的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所組成的一個結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的器官附件組織。毛囊實際上是由結(jié)締組織和上皮兩部分所組成，除了具有結(jié)締組織和血管的真皮乳頭（毛乳頭）外，毛囊其余部分都是由表皮細胞分化而來。真皮毛乳頭細胞位于毛囊基底部，是一類成纖維細胞。在毛囊發(fā)育早期，真皮細胞向單層上皮細胞發(fā)出第一真皮信號，刺激上皮局部形成毛基板。隨后毛基板細胞向下方的真皮發(fā)出第一表皮信號，誘導(dǎo)其形成有成纖維細胞組成的凝集細胞團。在此過程中，毛母質(zhì)細胞逐漸包裹凝集細胞團，形成成熟的真皮毛乳頭細胞。作為毛囊中的重要細胞群，真皮毛乳頭細胞的分子機制和臨床應(yīng)用正在被逐漸認識和解析。

產(chǎn)品名稱：大鼠真皮毛乳頭細胞

組織來源：毛囊

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠真皮毛乳頭細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介

實驗室分離的大鼠真皮毛乳頭采用膠原酶-蛋白酶混合消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的大鼠真皮毛乳頭經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶(vWFcp)試劑盒 ，英文名： vWFcp ELISA Kit

Mouse osteoclast differeiation factor (ODF) ELISA Kit 小鼠破骨細胞分化因子(ODF)試劑盒

Mousetissueinhibitorsofmetalloproteinase4,TIMP-4ELISAkit 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4(TIMP-4)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumancailageoligomericmaixprotein,COMPELISAKit人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白

細胞CMV(CYTOMEGALOVIRUS)病毒定性試劑盒20次

ELISAKitD1R大鼠多巴胺D1受體

小鼠腦素/腦尿肽(BNP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human caneous T cell atacting chemokine (CTACK/CCL27) ELISA Kit 人皮膚T細胞虜獲趨化因子(CTACK/CCL27)試劑盒

HumanGrowthHormoneBindingProtein,GHBPELISAKit 人生長激素結(jié)合蛋白(GHBP)試劑盒 96T/48T 進口分裝

Human50%complemehemolysis,CH50試劑盒人血清總補體(CH50)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母總巰基含量熒光定量試劑盒20次

Mouseai-thrombieceptor,AELISAKit小鼠抗受體(A)試劑盒規(guī)格：96T/48T

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IgG3重組小鼠 IgG3-Fc 蛋白 Protein

表面活性物質(zhì)關(guān)聯(lián)蛋白J(SPJ)重組蛋白 Recombinant Surfactant Associated Protein J (SPJ)

CARHSP1重組人 CARHSP1 蛋白 Protein

CD46 Protein Human 重組人 CD46 蛋白

EDAR Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 EDAR 蛋白

FGFR3 Others Cynomolgus 食蟹猴 FGFR3 人細胞裂解液   星形膠質(zhì)細胞AM  CL-0241VCaP(人前列腺癌細胞)  正常小鼠Sertoli細胞;TM4  HEPG2.2.15   肝癌細胞HBV病毒株 小鼠原代骨髓巨噬細胞 大鼠原代骨骼肌微血管內(nèi)皮細胞

大鼠真皮毛乳頭原代細胞CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12 0.5mgCCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12) 單核細胞趨化蛋白5抗原

FST Protein Human 重組人 Follistatin / FST (FS288) 蛋白

CA4重組小鼠 Carbonic Anhydrase IV / Car4 蛋白 Protein

CD8A Protein Rat 重組大鼠 CD8A / Lyt2 蛋白 (Fc 標簽)

UBE2M重組人 UBE2M 蛋白 Protein