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詳細介紹
本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細胞屬性：
方法簡介
公司實驗室分離的大鼠椎間盤髓核采用膠原酶-蛋白酶混合消化法并結(jié)合軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的大鼠椎間盤髓核經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠椎間盤髓核原代細胞 | 組織來源 | 椎間盤組織 |
英文名稱 | Rat Nucleus Pulposus Cells | 貨號 | YS-01X7454 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細胞簡介：
大鼠椎間盤髓核細胞分離椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，分為中央部的髓核，富于彈性的膠狀物質(zhì)；周圍部的纖維環(huán)，由多層纖維軟骨環(huán)按同心圓排列。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負荷。髓核，是乳白色半透明膠狀體，富于彈性，為椎間盤結(jié)構(gòu)的一部分，位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質(zhì)構(gòu)成的彈性膠凍物質(zhì)。嬰幼兒時期的髓核含水量為80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生時體積大而松散，位于椎間盤的中央，至成年時位置移至椎間盤的中后部；在成年以前構(gòu)成髓核的主要物質(zhì)是大量蛋白多糖復合體、膠原纖維和纖維軟骨，隨著年齡的增長，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐漸減少，膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每3-4天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞培養(yǎng)方法：
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細胞培養(yǎng)皿中，將細胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進行細胞爬片，待細胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復染：用Harris蘇木素復染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
公司產(chǎn)品：
大鼠血管緊張素Ⅰ(AngⅠ)試劑盒 ，英文名： AngⅠ ELISA Kit
Mouse ischemia modified albumin (IMA) ELISA Kit 小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)試劑盒
Mouseconnectivetissuegrowthfactor,CTGFELISAKit 小鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanapoproteinA1,apo-A1ELISAKit人載脂蛋白A1
細胞ERK1/2激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
ELISAKitMCP-3/CCL7大鼠單核細胞趨化蛋白3
小鼠信號轉(zhuǎn)導分子7(Smad7)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat hepatocyte growth factor (HGF) ELISA Kit 大鼠肝細胞生長因子(HGF)試劑盒
Humansphingomyelin,SMELISAKit 人鞘0脂(SM)試劑盒 96T/48T 進口分裝
ChickenAlternativemacrophageactivation-associatedCCchemokine1,AmAC-1試劑盒雞巨噬細胞替代激活相關化學因子1(AmAC-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T
載玻片細胞ANDROGEECEPTOR蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次
Mousehiston-H2bELISAKit小鼠組蛋白H2b(histon-H2b)試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠FMS樣酪酸激酶3配體(Flt3L)試劑盒 96T/48T
小鼠FMS樣酪酸激酶3(Flt3)試劑盒 96T/48T
小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)試劑盒 96T/48T
小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)試劑盒 96T/48T
FGFR4重組食蟹猴 FGFR4 / FGF Receptor 4 蛋白 Protein
Isulin 胰島素(抗原 0.5mgIsulin 胰島素(抗原)
FAM3D重組人 FAM3D 蛋白 Protein
CD58 Protein Human 重組人 LFA-3 / CD58 蛋白 (Fc 標簽)
NAALADL1 Protein Mouse 重組小鼠 NAALADL1 蛋白
Gibco 17101015 Collagenase Type II 1g 人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)細胞HAMSC IL11RA Others Mouse 小鼠 IL11RA / IL11Rα 人細胞裂解液 CXCL12 Protein Canine 重組狗 CXCL12 / SDF-1 蛋白 HEF 小鼠原代宮頸上皮細胞 小鼠原代骨髓內(nèi)皮細胞
大鼠椎間盤髓核原代細胞MBP (Myelin Basic Protein, Rat 0.5mgMBP (Myelin Basic Protein, Rat)peptide 髓鞘堿性蛋白(多肽)大鼠
ERN1 Protein Human 重組人 ERN1 / IRE1 蛋白 (aa 465-977)
SELL重組食蟹猴 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 Protein
APOA1 Protein Mouse 重組小鼠 ApoA1 蛋白
IFNL1重組人 IL-29 / Interleukin-29 蛋白 Protein
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