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技術(shù)文章
改善農(nóng)藥分析的峰形并降低 LOQ
閱讀：330 發(fā)布時間：2024-11-21摘要本應(yīng)用簡報展示了使用 Agilent 1260 Infinity II Hybrid Multisampler，在安捷倫 FEED進樣模式下對溶于強洗脫有機溶劑中的極性農(nóng)藥進行多組分 LC/MS 分析。利用1260 Infinity II Hybrid Multisampler 以各種注入速度注入樣品，減輕溶劑效應(yīng)，并在色譜柱上捕獲和富集極性化合物。此技術(shù)可消除流穿現(xiàn)象，并提供更出色的峰形，從而改善檢測、定量和全自動峰積分。此技術(shù)可以應(yīng)用于在 QuEChERS 樣品前處理中使用純乙腈提取水果和蔬菜中的農(nóng)藥并進行分析的典型多組分分析方法。
前言極性化合物 LC/MS 分析的一個普遍問題是它們的色譜分離受到樣品溶劑洗脫強度的影響。隨著反相色譜中樣品溶劑洗脫強度的提高和進樣量的增加，早洗脫極性化合物的出峰性能受到影響，甚至?xí)?dǎo)致流穿，出現(xiàn)溶劑前沿峰。HPLC 儀器的進樣模式也對樣品中化合物的分離有很大影響。現(xiàn)代 HPLC 儀器經(jīng)過充分優(yōu)化，以盡可能減小擴散體積，從而獲得理想的出峰性能。遺憾的是，這種優(yōu)化使極性化合物在到達色譜柱柱頭時更有可能高度聚集在樣品溶劑中。為了防止峰分裂或流穿峰，通常利用夾層進樣或增加混合器等方式來促進極性化合物進入起始溶劑中。1260 Infinity II HybridMultisampler 可通過 FEED 進樣模式輸送樣品，無需改變流路即可將樣品與起始溶劑混合，且不影響出峰性能。此進樣模式無需對液相色譜系統(tǒng)進行任何手動干預(yù)。1260 Infinity II Hybrid Multisampler 還可以在經(jīng)典的流通式進樣模式下操作：只需在方法設(shè)置中單擊鼠標即可實現(xiàn)，能夠兼容之前的流通式進樣方法。前文所述的分析挑戰(zhàn)經(jīng)常出現(xiàn)在蔬菜和水果的極性農(nóng)藥多組分分析中，因為在QuEChERS 樣品前處理流程中，農(nóng)藥最終溶于乙腈。
本應(yīng)用簡報展示了新開發(fā)的進樣原理 FEED進樣的應(yīng)用。此進樣模式能夠通過樣品注入進行溶劑調(diào)制，對溶于乙腈等溶劑中的極性農(nóng)藥（這是 QuEChERS 樣品前處理后的普遍情況）進行多組分 LC/MS 分析。本文將介紹并討論通過樣品注入進行溶劑調(diào)制對出峰性能的積極影響，以及通過增加進樣量所獲得的最大靈敏度。
實驗部分儀器– Agilent 1260 Infinity II HybridMultisampler (G7167C)– Agilent 1260 Infinity II 全能泵(G7104C)– Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫箱(G7116B)– Agilent Ultivo 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) (G6465B)
色譜柱Agilent ZORBAX StableBond C18,2.1 × 100, 1.8 µm（貨號 858700-902）軟件– 用于 Ultivo LC/TQ 的 AgilentMassHunter 采集軟件 V1.1– Agilent MassHunter 定性分析軟件V10.0– Agilent MassHunter 定量分析軟件V10.0農(nóng)藥高滅
校準將 8 種農(nóng)藥各自的儲備液混合，使?jié)舛冗_到 1000 ppb。將該溶液用乙腈稀釋，得到濃度為 100、20、10、2、1 和 0.2 ppb的一系列校準溶液。樣品使用乙腈從草莓中提取的 QuEChERS 提取物：加標了所有農(nóng)藥（加標濃度為10 ppb）以及不加標。樣品前處理
1. 稱取 10.00 ±0.01 g 均質(zhì)草莓樣品置于50 mL 離心管中2. 根據(jù)需要加標，然后加入 10 mL 乙腈，加蓋并渦旋 1.5 分鐘
3. 加入 Agilent QuEChERS 萃取試劑盒，原始方法（貨號 5982-5550）萃取鹽(4 g) 并渦旋 1.5 分鐘
4. 以 4000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 4 分鐘
5. 將 6 mL 上清液轉(zhuǎn)移至 15 mL AgilentQuEChERS 分散式通用 SPE 管（貨號5982-5056）中
6. 渦旋 1.5 分鐘，然后以 4000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 4 分鐘7. 將上清液轉(zhuǎn)移到干凈的試管中8. 使用 Agilent Captiva 優(yōu)級針頭過濾器（貨號 5190-5083）過濾到自動進樣器樣品瓶中
溶劑和化學(xué)品– 所有溶劑均購自德國 Merck 公司– 化學(xué)品也購自德國 Merck 公司– 新制超純水產(chǎn)自配置 LC-Pak Polisher和 0.22 µm 膜式終端過濾器 (Millipak)的 Milli-Q Integral 水純化系統(tǒng)
結(jié)果與討論為了證明進樣模式（即，F(xiàn)EED 進樣或流通式進樣）的影響，將八種早洗脫極性農(nóng)藥的混合物溶于乙腈中，各化合物的最終濃度為 10 ppb。將此樣品以 0.5、1.0、1.5 和 2.0 μL 的不同進樣量進樣，考察兩種進樣模式下的出峰性能。圖 1 突出顯示了兩種進樣模式下第一個洗脫的農(nóng)藥MRM 定量離子峰形。當進樣量為 0.5 μL 時，F(xiàn)EED 進樣獲得了峰形良好的峰（圖 1：A1）。在流通式進樣模式下獲得的峰也具有良好的峰形，但峰頂略有分裂（圖 1：A2）。隨著進樣量的增加，F(xiàn)EED 進樣模式下的峰高增加，同時仍保持出色的峰形（圖 1：B1 至 D1）。相比之下，對于流通式進樣模式，在進樣量為 1.0 μL 時峰開始分裂（圖 1：B2）。在1.5 μL 和 2.0 μL 的更大進樣量下，農(nóng)藥開始流穿，出現(xiàn)溶劑前沿峰（圖 1：C2 至 D2）。在兩種進樣模式下，進樣量為 1.0 µL 和1.5 μL 時采集的 8 種農(nóng)藥的結(jié)果如附錄圖 A 和 B 所示，其中顯示了 MRM 定量離子和定性離子峰。在兩種進樣模式下，在 0.5 μL 的進樣量下，洗脫時間晚于的化合物均表現(xiàn)出良好的峰形，且無分裂。但是，在流通式進樣模式下，一些峰在 1.0 μL 的進樣量下開始分裂（附錄：圖 A）。當進樣量為 1.5 μL 時，所有峰開始分裂或流穿，出現(xiàn)溶劑前沿峰（附錄：圖 B）。即使是最后一種農(nóng)藥（在大約 3.7 分鐘處洗脫），在進樣量為 2.0 μL時也開始分裂。