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化學感受態(tài)細胞該菌株衍生自大腸桿菌菌株B，具有l(wèi)on和ompT蛋白酶缺陷的優(yōu)點，是目前應用廣泛的表達宿主菌之一，其操作方法如下：
1、化學感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，6分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手滑動EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2、42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置5分鐘，晃動會降低轉化效率。
3、向離心管中加入0.9mL室溫S.O.C.(S.O.C.營養(yǎng)豐富，可提高轉化效率)或LB培養(yǎng)基。
4、30℃，250rpm復蘇60分鐘。當質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時，30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組的概率，若轉化controlpUC19計算轉化效率，則需37℃，225rpm復蘇60分鐘
5、篩選平板提前拿出放30℃孵育使平板溫度保持30℃，吸取50-100μl直接涂篩選平板或5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的LB培養(yǎng)基上。
6、將平板倒置放于30℃培養(yǎng)20-24小時或37℃過夜培養(yǎng)。當質(zhì)粒中含有不穩(wěn)定片段時，30℃培養(yǎng)可降低錯誤重組的概率，若轉化controlpUC19計算轉化效率，則需37℃培養(yǎng)過夜。
化學感受態(tài)細胞注意事項:
1、對不穩(wěn)定DNA的片段克隆或逆轉錄病毒/慢病毒載體的構建，涂板后平板應在30℃培養(yǎng)，以減少發(fā)生錯誤重組的概率。
2、制備高純度病毒質(zhì)粒時，應使用新鮮轉化的平板接菌，新鮮菌液提取質(zhì)粒，菌液不可低溫保存后使用。
3、對不穩(wěn)定的克隆或病毒質(zhì)粒優(yōu)先以質(zhì)粒狀態(tài)保存，盡量避免將質(zhì)粒保存在大腸桿菌細胞中。
4、化學感受態(tài)細胞一般在冰中緩慢融化。插入冰中10分鐘內(nèi)加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。混入目的DNA時應輕柔操作。
5、轉化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少終用于涂板的菌量。
