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森林腦炎ELISA檢測試劑盒說明書
閱讀：637 發(fā)布時間：2019-7-24森林腦炎（蜱傳腦炎）病毒ELISA檢測試劑盒
廣州健侖生物科技有限公司
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【產(chǎn)品名稱】：森林腦炎ELISA檢測試劑盒說明書
【預期用途】
本試劑盒可用于定量檢測人血清血漿和腦脊髓液中的抗腦炎病毒（TEBV）的IgG抗體，從而控制體液免疫狀態(tài)和確定疫苗接種后的血清轉(zhuǎn)化。鑒別明顯的和潛在的腦炎病毒的感染，通常附帶著抗腦炎病毒的IgM的檢測。
【實驗步驟】
1. 將200μL已稀釋的校準品、質(zhì)控品和樣本加到相應的微孔中。
2. 用封板片封板，室溫下（18-25℃）孵育1小時
3. 揭去封板片，棄去反應液，用稀釋后的洗滌液洗板3次（250μL/孔/次），后通過拍板拍去殘留的液體
4. 將200μL已稀釋的酶聯(lián)物加到每個孔中
5. 用封板片封板，在室溫下（18-25℃）孵育1小時
6. 重復步驟3
7. 將200μL TMB底物液加到每個孔中
8. 室溫(18-25℃)孵育30分鐘
9. 按加TMB底物液的順序，將50μL的終止液加到每個孔中，輕輕混勻
10. 在加入終止液后10分鐘內(nèi)，用酶標儀在450nm±10nm處讀數(shù)。
【結(jié)果的計算】
1. 標準曲線方法
在半對數(shù)紙上（或者使用自動化儀器）以每個標準品的OD值為Y軸，相應的濃度為X軸做出標準曲線，推薦使用4參數(shù)邏輯函數(shù)（Y=d+(a-b)/(1+(x/c)b)）。
樣本的濃度應當直接從標準曲線中讀取，如果有稀釋，則在計算中應該乘以稀釋倍數(shù)，如果樣本的濃度過高，則需要按照實驗前設置說明稀釋樣本。
2. 一點標定法
（1） 樣本濃度的手冊檢測
需要使用用校準品4、質(zhì)控血清和樣本各自的平均OD值。校準品4的OD必須要在的范圍內(nèi)（見一點標定法評估表）。每次檢測都必須計算檢測特殊的校正因子。校準品4的理論OD值都是按特定批次檢測得出的（見一點標定法評估表）。將質(zhì)控血清和樣本的OD乘以校正因子：
質(zhì)控血清和樣本濃度可以從批次參考曲線中讀出。
例子：
校準品4的理論OD值 OD=1.377
校準品4的檢測OD值 OD=1.273
校正因子F F=1.082
樣本的檢測OD值 OD=0.937
樣本的校正OD值 OD=1.014
讀取濃度 0.5VIEU/mL
（2） 腦脊髓液樣本濃度的計算（一點標定法軟件）
打開名為“One Point Calibration TBE IgG Liquor”的Excel文件，將QC證書的下列指標填到Excel中：
校準品4的理論OD值
校準品4的OD范圍
臨界1和臨界2的理論OD值
臨界1 OD=灰區(qū)的低點
臨界2 OD=灰區(qū)的高點
填入檢測到的校準品4平均OD，將腦脊髓液樣本的鑒別和OD插入到已準備好的計算單中。腦脊髓液樣本的求值和OD都會自動完成。
【結(jié)果的判定】
血清/血漿
＜63VIEU/mL 陰性
63-126VIEU/mL 灰區(qū)
＞126VIEU/mL 陽性
腦脊髓液
OD＜臨界1理論OD 陰性
臨界1理論OD＜OD＜臨界2理論OD 灰區(qū)
OD＞臨界2理論OD 陽性
【結(jié)果的說明】
1. 疫苗
通過檢測血清血漿中的抗TBE的IgG抗體來證明血清轉(zhuǎn)化
（1） 抗TBE IgG陰性
接種疫苗后無血清轉(zhuǎn)化
（2） 抗TBE IgG 灰區(qū)
可能有血清轉(zhuǎn)化，建議在2~4周內(nèi)再次檢測
（3） 抗TBE IgG陽性
接種疫苗后有血清轉(zhuǎn)化
2. 感染
（1） 抗TBE IgM和抗TBE IgG 陰性
無感染
（2） 抗TBE IgM陰性和TBE IgG 陽性
這可能是潛在的免疫或者是幾周或幾月之前的感染
（3） 抗TBE IgM陽性和TBE IgG陰性
可能有新近感染
（4） 抗TBE IgM和抗TBE IgG都陽性
有感染
