產(chǎn)品簡介
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱
ATDC5 小鼠胚胎瘤細(xì)胞(通過STR)
細(xì)胞圖片
細(xì)胞培養(yǎng)說明書
1、 細(xì)胞傳代:
1) 細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時, 棄 25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液, 用 PBS 清洗細(xì)胞一次;
2) 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中, 倒置顯微鏡下觀察, 待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml *培養(yǎng)
液終止消化, 再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落, 然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中, 1000rpm 離心 5min;
3) 棄上清, 沉淀細(xì)胞用 1-2ml *培養(yǎng)基重懸, 然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代, 最后放入 37℃, 5%CO2 細(xì)胞
培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
2、 細(xì)胞凍存:
1) 細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時, 棄 25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液, 用 PBS 清洗細(xì)胞一次;
2) 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中, 倒置顯微鏡下觀察, 待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終
止消化, 輕輕吹打細(xì)胞使之脫落, 然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中, 1000rpm 離心 5min;
3) 用適量的凍存液(FBS: DMSO=9 : 1) 重懸細(xì)胞, 并放置于凍存管中;
4) 先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h, 然后將其移入-80℃過夜, 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。 使用程序
降溫盒可直接放入-80℃。
3、 細(xì)胞復(fù)蘇:
1) 從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意: 佩戴防爆管面具), 快速將其置入 37℃水浴中解凍, 直至凍存管中無結(jié)
晶, 然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁;
2) 將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml *培養(yǎng)基的 15ml 離心管中, 1000rpm 離心 5min;
3) 棄上清, 沉淀用 6ml *培養(yǎng)基重懸, 接種 25cm2 培養(yǎng)瓶, 于 37℃, 5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
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