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細胞培養(yǎng)說明書

1、 細胞傳代：
1） 細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時， 棄 25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液， 用 PBS 清洗細胞一次；
2） 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中， 倒置顯微鏡下觀察， 待細胞回縮變圓后加入 5ml *培養(yǎng)
液終止消化， 再輕輕吹打細胞使之脫落， 然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；
3） 棄上清， 沉淀細胞用 1-2ml *培養(yǎng)基重懸， 然后按 1:2 比例進行分瓶傳代， 最后放入 37℃， 5%CO2 細胞
培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
2、 細胞凍存：
1） 細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時， 棄 25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液， 用 PBS 清洗細胞一次；
2） 添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中， 倒置顯微鏡下觀察， 待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終
止消化， 輕輕吹打細胞使之脫落， 然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；
3） 用適量的凍存液（FBS： DMSO=9 ： 1） 重懸細胞， 并放置于凍存管中；
4） 先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h， 然后將其移入-80℃過夜， 24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。 使用程序
降溫盒可直接放入-80℃。
3、 細胞復蘇：
1） 從液氮中取出細胞凍存管（注意： 佩戴防爆管面具）， 快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結
晶， 然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2） 將凍存管中的細胞移至含 6ml *培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；
3） 棄上清， 沉淀用 6ml *培養(yǎng)基重懸， 接種 25cm2 培養(yǎng)瓶， 于 37℃， 5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。