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液相色譜柱的分類方法
液相色譜柱的分類方法很多，可以按照鍵合相類型、用途、基質(zhì)種類等進(jìn)行分類。
按照分離規(guī)模，我們可以把它分成以下八種：納流柱、毛細(xì)管柱、微徑柱、窄徑柱、溶劑節(jié)省柱、分析柱、半制備柱、制備柱。
目前對(duì)于液相色譜分析較常用的是分析柱和窄徑柱。
其中分析柱的內(nèi)徑是4.6mm，常用于常規(guī)液相，通常情況下它的流量建議在0.5-3ml/min。
窄徑柱大多使用在快速液相UPLC或UHPLC中，建議流量是0.1-0.5ml/min。
而納流柱、毛細(xì)管柱、微徑柱它們的內(nèi)徑分別是0.1-0.075mm，0.3/0.5mm，1.0mm，它們的靈敏度較高，比較適合在LCMS中使用，其中毛細(xì)管柱和納流柱可以應(yīng)用在多肽和蛋白質(zhì)的分析中。
而溶劑節(jié)省柱大多是指內(nèi)徑3mm的色譜柱，由于生產(chǎn)工藝等原因它的應(yīng)用并不是很多，如果您正在使用，較建議使用的流量是0.3-1.5ml/min。
半制備柱和制備柱大多使用在分離較純的標(biāo)準(zhǔn)品中。其中半制備柱使用在mg級(jí)制備分離。制備柱使用在大規(guī)模制備數(shù)百mg至1g制備。
它們的內(nèi)徑分別是9.4mm和21.2mm，流量建議設(shè)為5-10ml/min, 20-60ml/min。
了解了液相色譜柱的分類，大家就可以根據(jù)自己的需求進(jìn)行選擇了。
在選擇色譜柱之前，也可以先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。
1.樣品是極性的且弱酸性的；就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測(cè)，即要選擇承受100%純水且對(duì)極性化合物保留很好的色譜柱
2. 如果樣品極性太強(qiáng)，或酸性太強(qiáng)；可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC（親水色譜），也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱（缺點(diǎn)是離子對(duì)試劑平衡時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否 則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)，另外離子對(duì)試劑很難洗下來(lái)，基本上用了離子對(duì)的色譜柱就不能再用于其它實(shí)驗(yàn)）
3. 若樣品是堿性的；可選擇高純硅膠柱（高純硅膠缺少金屬雜質(zhì)，且硅膠端基封尾）或一些經(jīng)過(guò)修飾的C18柱（如極性嵌入技術(shù)或堿去活技術(shù)等），他們都會(huì)減少堿性化合物的拖尾，一般會(huì)選擇中性或偏堿的條件下做，因?yàn)檫@樣可增加堿性樣品的保留
4.如果堿性化合物的極性太強(qiáng)，或堿性太強(qiáng)；可以選擇寬pH的C18色譜柱在高pH值檢測(cè)（優(yōu)點(diǎn)是方法開(kāi)發(fā)簡(jiǎn)單，缺點(diǎn)是目前實(shí) 現(xiàn)這一技術(shù)的色譜柱品牌比較少，價(jià)格也高）或者選用HILIC色譜柱（硅膠柱在反相條件下使用，這也是很經(jīng)典的檢測(cè)堿性樣品的方法）選擇強(qiáng)離子交換柱（缺點(diǎn) 是不能用來(lái)分析其它樣品，對(duì)流動(dòng)相pH要求比較精密，否則很難重復(fù)實(shí)驗(yàn)）也有使用C18+強(qiáng)陰離子對(duì)試劑或強(qiáng)陰離子交換色譜柱