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甲基化特定的MLPA

甲基化特異性（MS）-MLPA ®是的變體MLPA技術(shù)。使用MS-MLPA，可以同時(shí)對(duì)多個(gè)目標(biāo)的甲基化進(jìn)行半定量分析。

MS-MLPA探針

像常規(guī)MLPA探針混合物一樣，MS-MLPA探針混合物包含靶向特定基因組序列的探針。每個(gè)探針均由兩部分組成：左探針寡核苷酸和右探針寡核苷酸（LPO和RPO）。MS-MLPA探針混合物中的某些探針靶向包含甲基化敏感性HhaI核酸內(nèi)切酶限制性位點(diǎn)的區(qū)域。這些探針可用于甲基化分析。

MS-MLPA的原理

探針與樣品DNA上的靶序列雜交。然后將HhaI酶用于消化未甲基化的雙鏈探針-DNA復(fù)合物。

與未甲基化的樣品DNA的復(fù)合物被消化。消化的探針無(wú)法按指數(shù)擴(kuò)增，因此不會(huì)產(chǎn)生信號(hào)。具有甲基化樣品DNA的復(fù)合物不會(huì)被HhaI消化，并會(huì)產(chǎn)生正常信號(hào)。

MS-MLPA反應(yīng)

對(duì)于MS-MLPA的步驟是高度相似的概述的MLPA。重要的區(qū)別是過(guò)夜雜交后，該反應(yīng)分為未消化和消化的反應(yīng)。

未消化的反應(yīng)用于確定拷貝數(shù)。在用于甲基化分析的消化反應(yīng)中，HhaI酶與Ligase-65酶同時(shí)添加。

數(shù)據(jù)分析

Coffalyser用于分析數(shù)據(jù)。使用與常規(guī)MLPA相同的未消化反應(yīng)確定拷貝數(shù)。通過(guò)將消化反應(yīng)中的每個(gè)探針信號(hào)與未消化反應(yīng)中的相應(yīng)信號(hào)進(jìn)行比較，可以確定DNA樣品中的甲基化百分比。

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