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蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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當(dāng)前位置:蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司>>層析過(guò)濾>> Ni IDA Beads填料組氨酸標(biāo)簽蛋白親和純化介質(zhì)過(guò)濾層析法

組氨酸標(biāo)簽蛋白親和純化介質(zhì)過(guò)濾層析法

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產(chǎn)品型號(hào)Ni IDA Beads填料

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地蘇州市

更新時(shí)間:2025-03-06 07:45:10瀏覽次數(shù):1874次

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產(chǎn)地類別 國(guó)產(chǎn) 價(jià)格區(qū)間 面議
應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥
組氨酸標(biāo)簽蛋白親和純化介質(zhì)過(guò)濾層析法 Ni IDA Beads填料可以用于各種表達(dá)來(lái)源(如大腸桿菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞)的組氨酸標(biāo)簽(6xHis-tagged)蛋白的純化。

組氨酸標(biāo)簽蛋白親和純化介質(zhì)過(guò)濾層析法 Ni IDA Beads填料

      Ni IDA Beads可以用于各種表達(dá)來(lái)源(如大腸桿菌、酵母、昆蟲(chóng)細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞)的組氨酸標(biāo)簽(6xHis-tagged)蛋白的純化。它是以4%瓊脂糖凝膠為基質(zhì),通過(guò)化學(xué)方法偶聯(lián)了三配位的亞氨基二乙酸(IDA),螯合鎳離子(Ni2+)后,可以形成比較穩(wěn)定的平面四邊形結(jié)構(gòu),從而有更多的位點(diǎn)與組氨酸標(biāo)簽上的咪唑環(huán)繼續(xù)配位,達(dá)到結(jié)合目的蛋白的效果。但是,這樣的結(jié)構(gòu)比較容易受到其他小分子的進(jìn)攻,鎳離子易被還原或者被螯合,從而破壞其化學(xué)結(jié)構(gòu),無(wú)法結(jié)合目的蛋白。Ni IDA Beads具有載量高,性能和價(jià)值匹配等優(yōu)點(diǎn)。


NI IDA示意圖


1. Ni IDA Beads產(chǎn)品性能

項(xiàng)目

性能

基質(zhì)

4%瓊脂糖凝膠

載量(/mL基質(zhì))

>40mg 6XHis-tagged protein

微球粒徑(μm

45–165

最大壓力

0.1 MPa, 1 bar

儲(chǔ)存緩沖液

20% 乙醇的1XPBS

儲(chǔ)存溫度

4°C-30°C


2.純化流程

2.1 緩沖液的準(zhǔn)備

可使用下列推薦緩沖液,也可根據(jù)自己的使用習(xí)慣配置不同的緩沖液體系,基本原理就是低咪唑上樣,高咪唑洗脫。緩沖液在使用前盡量用0.22 μm 或者0.45 μm 濾膜過(guò)濾除菌。具體配置方法見(jiàn)表2。


組氨酸標(biāo)簽蛋白親和純化介質(zhì)過(guò)濾層析法 Ni IDA Beads填料純化蛋白流程:

2.2.1 細(xì)菌或酵母表達(dá)的蛋白

1)挑取單菌落到培養(yǎng)基中,根據(jù)載體使用說(shuō)明,加入相應(yīng)濃度的誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)相應(yīng)的時(shí)間。

2)表達(dá)結(jié)束后,將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移到離心杯中,7,000 rpm(7,500×g),離心15min 收集菌體,然后按照菌體∶Lysis Buffer=1∶10(WNV)加入

Lysis Buffer,加入終濃度為 1mM的 PMSF。加入溶菌酶(工作濃度為 0.2-0.4 mg/ml,如果表達(dá)的宿主細(xì)胞內(nèi)含 pLysS 或 pLysE,可以不加溶菌酶),同時(shí)也可加入其他蛋白酶抑制劑,但不能影響目的蛋白與樹(shù)脂的結(jié)合)。

3)將菌體沉淀懸浮起來(lái),(如果菌液濃度高,也可考慮加入10 ug/ml RNase A和5 μg/ml DNase I),混勻,放置于冰上,然后冰上超聲破碎細(xì)胞,至菌液基本保持澄清。

4)將澄清的破碎液轉(zhuǎn)移至離心管中,10,000 rpm(15,000×g),4℃離心 20-30 min。取上清,置于冰上備用或-20℃保存。

2.2.2 酵母、昆蟲(chóng)和哺乳細(xì)胞分泌表達(dá)可溶性蛋白

1)將細(xì)胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)移至離心杯,5.000 rpm(3.800×g);離心10min,收集菌體得上清,如上清中不含 EDTA、組氨酸和還原劑等物質(zhì),即可直接加入柱子使用;如含有 EDTA、組氨酸和還原劑等物質(zhì),需用Lysis Buffer 透析才能加入柱子。2)對(duì)于大量體積的上清,需加入硫酸銨沉淀濃縮后,蛋白還需用 Lysis Buffer 透析后才能加入柱子。

2.3 Ni IDA Beads 重力柱的裝填

1)取合適規(guī)格的重力層析柱,裝入下墊片,加入適量純水潤(rùn)洗柱管和墊片,關(guān)閉下出口。

2)將 Ni IDA Beads 混合均勻,用槍頭吸取適量漿液加入至重力柱中(介質(zhì)實(shí)際體積占懸液的一半),打開(kāi)下出口流干保護(hù)液。

3)加入適量純水沖洗介質(zhì),待柱管中液體重力流干后,關(guān)閉下出口。

4)裝入潤(rùn)洗后的上墊片,確保墊片與填料之前沒(méi)有空隙,且保持水平。

5)裝填好的重力柱可以直接加入平衡液進(jìn)行平衡,暫不使用時(shí)則加入保護(hù)液,4-30℃保存。


產(chǎn)品訂購(gòu)

     蘇州阿爾法生物提供的瓊脂糖凝膠介質(zhì)、葡聚糖凝膠介質(zhì)等蛋白純化和分離填料以及相關(guān)生物試劑。另外還提供、氨酸標(biāo)簽蛋白親和純化介質(zhì)、GST-tag蛋白親和純化介質(zhì)、 MBP-tag蛋白親和純化介質(zhì)、Biotin-tag蛋白親和純化介質(zhì)、Strep-tagll標(biāo)簽親和純化介質(zhì)、 標(biāo)簽抗體親和純化介質(zhì)等標(biāo)簽蛋白親和層析介質(zhì); 離子交換層析 、色譜柱、離子交換層析樹(shù)脂、疏水層析介質(zhì)、 磁性微球等。


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