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細胞計數(shù)儀是一種快速簡便的自動化細胞數(shù)量和活率測量裝置，目前主要通過基于顯微圖像的圖像識別法和基于阻抗的電阻抗計數(shù)法。
基于顯微圖像的圖像識別法，通常通過臺盼藍染色或AO/PI等熒光染料染色，整合先進的光學成像技術(shù)和智能圖像識別技術(shù)，進行自動細胞計數(shù)檢測。臺盼藍是細胞活性染料，常用于檢測細胞膜的完整性，以檢測細胞是否存活?；罴毎募毎ね暾芘懦馀_盼藍，不會被染成藍色；而死細胞由于細胞膜破損或不完整，會被臺盼藍染成藍色，因此可借助臺盼藍染色進行細胞計數(shù)，區(qū)分死活細胞。吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）是可以與細胞核內(nèi)雙鏈DNA結(jié)合的熒光染料。
AO可以自由穿透細胞膜，嵌入所有細胞（活細胞和死細胞）的細胞核中發(fā)出綠色熒光；PI只能通過破損的細胞膜，即死細胞的細胞膜，嵌入死細胞的細胞核中發(fā)出紅色熒光。當兩種染料同時存在于死細胞核中時，會發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移，從而導致死細胞發(fā)出紅色熒光。因此可通過AO/PI準確區(qū)分死活細胞，進行準確細胞計數(shù)。
細胞計數(shù)儀計量校準以下校準項目應在細胞計數(shù)儀經(jīng)過開機預熱、儀器達到正常工作條件后進行，校準前應當確保儀器工作狀態(tài)正常，參照附錄 A 進行校準原始數(shù)據(jù)記錄。
1 外觀要求用目視并配合手動操作進行檢查。儀器外表應光滑平整，不應有影響工作性能的機械損傷；顯示屏表面應平整潔凈無劃痕，讀數(shù)清晰；開關(guān)及按鍵功能良好。儀器應有以下標識：名稱、型號、編號、生產(chǎn)廠家、出廠日期。
2 測試前準備開啟儀器，參照儀器使用說明書，使儀器達到最佳工作條件。根據(jù)客戶使用要求、被校準儀器的日常工作模式和選取的標準物質(zhì)類型選取合適的細胞測量模式。
3 空白值 JJF xxxx-xxxx 7取空白稀釋液、純水或蒸餾水進行上樣計數(shù)，測量 4 次，記錄測量值并取其中的最高值作為空白值。
4 示值誤差儀器的示值誤差以細胞濃度（總細胞濃度、活細胞濃度和死細胞濃度）標準物質(zhì)、細胞活率標準物質(zhì)、顆粒直徑標準物質(zhì)測量值與標準值的誤差表示。根據(jù)被校準儀器的日常工作模式選取合適濃度、比例和顆粒直徑的標準物質(zhì)，使用標準物質(zhì)前上下顛倒 30-50 次左右從而保證充分混勻（瓶底無沉積物）。用移液器從充分混勻的標準物質(zhì)樣本液體中間層吸取液體進行上樣計數(shù)，測量 5 次，記錄測量值，并按照公式（1）進行示值誤差計算。CiCs（1）式中：—細胞計數(shù)器示值誤差，/mL、%或 μm； Ci—5 次測量值的平值，/mL、%或 μmCs—標準值，/mL、%或 μm。
5 測量重復性儀器重復性以細胞濃度（總細胞濃度、活細胞濃度和死細胞濃度）標準物質(zhì)、細胞活率標準物質(zhì)、顆粒直徑標準物質(zhì) 10 次測量值的實驗標準偏差表示。根據(jù)被校準儀器的日常工作模式選取合適濃度、比例和顆粒直徑的標準物質(zhì)，使用標準物質(zhì)前上下顛倒 30-50 次左右從而保證充分混勻（瓶底無沉積物）。用移液器從充分混勻的標準物質(zhì)樣本液體中間層吸取液體進行上樣計數(shù)，測量 10 次，記錄測量值，并按照公式
（1）進行示值誤差計算。1( )21nC CSTDnii i
（2）式中：STD-測量值的標準偏差，/mL、%或 μm； n—測量次數(shù)； JJF xxxx-xxxx 8 Ci —第 i 次測量值，/mL、%或 μm； Ci —測量平均值，/mL、%或 μm。8 校準結(jié)果表達經(jīng)校準后的細胞計數(shù)儀應填發(fā)校準證書，校準證書應符合 JJF1071-2010 中5.12 的要求，參照附錄 C 給出校準項目名稱、測量值以及擴展不確定度。9 復校時間間隔送校單位可根據(jù)實際情況自主決定細胞計數(shù)儀的復校時間間隔，建議不超過1 年。
公司背景介紹：
澤恒.華譜在計量校準、驗證與確認的優(yōu)勢是專注做生物制藥質(zhì)控服務，針對一些特殊的儀器都非常熟悉，核心團隊來源于制藥公司和儀器廠家，對儀器和GMP法規(guī)都很熟悉，比如：我們團隊專門研發(fā)了替代進口的熒光定量PCR儀校準裝置，大大降低熒光定量/定性PCR儀校準的成本（遠低于同行）；我們開發(fā)了細胞計數(shù)儀的校準內(nèi)部規(guī)程；開發(fā)了細胞復蘇儀的內(nèi)部校準規(guī)程；開發(fā)了凝膠電泳掃描儀的校準規(guī)程；我們開發(fā)了溫度驗證所需要的超低溫和超高溫一體化無線探頭，降低用戶大量使用探頭時的成本，代替了進口；這些例子還有很多，因為我們都是生物出身，所以我們關(guān)注每一個生物用戶工藝要求，在生物制藥儀器設備上面專注，“與質(zhì)量同行、做儀器設備質(zhì)控"，為了讓生物制藥更安全而努力。
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