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中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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miRNA mimics實(shí)驗(yàn)

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更新時(shí)間:2024-06-17 13:31:00瀏覽次數(shù):499次

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miRNA mimics實(shí)驗(yàn)是模擬生物體內(nèi)源的miRNAs,運(yùn)用化學(xué)合成的方法合成,能增強(qiáng)內(nèi)源性miRNA的功能。

序列分析表明,至少有1/3的人類基因miRNA調(diào)控相關(guān),而且越來越多的試驗(yàn)證據(jù)表明miRNA還有很多功能未被發(fā)現(xiàn)。研究基因的功能通常是將其從基因組中敲除,然后觀察敲除前后的變化,但在破譯miRNA的功能,我們一般不會(huì)采用這種策略,而是通過增強(qiáng)或減弱該miRNA的表達(dá)來鑒定其功能。

miRNA mimic能模擬細(xì)胞中內(nèi)源性成熟miRNA的高水平表達(dá),以增強(qiáng)內(nèi)源性miRNA的調(diào)控作用,是miRNA功能研究的一大利器。miRNA mimic是一種簡(jiǎn)單高效的miRNA研究工具,只需用轉(zhuǎn)染試劑包裹即可轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞,無需構(gòu)建載體的繁瑣操作,無需病毒防護(hù)方面的擔(dān)憂,用轉(zhuǎn)染對(duì)照即可觀察其轉(zhuǎn)染效率。

miRNA mimic的轉(zhuǎn)染效果,可從靶基因RNA表達(dá)水平,蛋白表達(dá)水平,細(xì)胞功能等方面檢測(cè)。這些實(shí)驗(yàn)?zāi)軌颢@得miRNA的生物學(xué)功能數(shù)據(jù),及應(yīng)用于miRNA的靶基因驗(yàn)證方面。通常這些實(shí)驗(yàn)涉及到miRNA mimic的轉(zhuǎn)染,或者與報(bào)告基因載體共轉(zhuǎn)。

MEF細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染miRNA表達(dá)載體(2ug/mL)或者miRNA mimic(50nM),48h后檢測(cè)miRNA的表達(dá),結(jié)果顯示,表達(dá)載體僅能實(shí)現(xiàn)10倍的過表達(dá),而miRNA mimic可實(shí)現(xiàn)600倍以上的過表達(dá)。對(duì)于短期(<1周)的miRNA功能獲得性細(xì)胞研究而言,miRNA mimic是zhd選擇。

從生物學(xué)機(jī)理上來說,miRNA有成為腫瘤標(biāo)志物的優(yōu)勢(shì),它是腫瘤細(xì)胞主動(dòng)分泌的,隨著腫瘤細(xì)胞的生成、凋零,miRNA的表達(dá)量一直在變化,所以每種miRNA的表達(dá)量代表了在某一刻人類體內(nèi)健康或者疾病的信息。 MiRXES在人體這2000多種miRNA中,他們找出了與胃癌高度相關(guān)的12種miRNA,當(dāng)人體中出現(xiàn)胃癌細(xì)胞時(shí),這12種miRNA在血液中的濃度會(huì)出現(xiàn)異常。



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