剛地弓形蟲PCR試劑盒

Toxophasma gondii

產(chǎn)品及特點(diǎn)

剛地弓形蟲（Toxoplasma gondii）是一種可感染包括人在內(nèi)所有溫血?jiǎng)游?的細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲，對人畜的危害很大，孕婦感染弓形蟲后導(dǎo)致早產(chǎn)、流產(chǎn)、胎 兒發(fā)育畸形，是當(dāng)今致畸胎的四大原因之一，也是免疫功能低下患者死亡的主要 原因（如 AIDS 病人等）。傳統(tǒng)的顯微鏡病原體檢查方法，檢出率低；以抗體檢 測為主的血清學(xué)診斷方法不能準(zhǔn)確反映弓形蟲現(xiàn)時(shí)感染情況。PCR 檢測技術(shù)的發(fā) 展為解決這些問題提供了更靈敏的方法。本產(chǎn)品就是以 PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的 專門檢測剛地弓形蟲的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)： 

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA。

2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。 3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)崗地弓形蟲高度保守的、長為 529 bp 的重復(fù)序列設(shè) 計(jì)。

5. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

6. 本產(chǎn)品足夠 50 次 40uL 體系的常規(guī) PCR。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。

剛地弓形蟲PCR試劑盒規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。

自備試劑 樣品 DNA。

使用方法 一、樣品 DNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽 性對照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 陽性對照的 1 千倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此 作為 PC。另外用水作為 NC。

2. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)寄生蟲 DNA 提取 試劑盒兼容。 

二、陽性對照

3、為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體細(xì)菌做陽性對 照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。

4、用本試劑盒的陽性對照原液稀釋制備陽性對照工作液時(shí)，由于陽性對照原液 濃度非常高，一定要注意不要污染本試劑盒的其他試劑和成分。

三、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40uL 體系）

5、對 N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽性對照和一個(gè) PCR 陰性對 照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè) PCR 管中分別加入下列成分： 

四、PCR 反應(yīng)參數(shù) 

五、電泳檢測

6、取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在 擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。預(yù)期的 PCR 產(chǎn) 物長度為 212bp。陽性對照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴(kuò)增， 否則實(shí)驗(yàn)無效。對沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴(kuò)增以 排除 PCR 抑制劑的感染。