二手安捷倫1200液相色譜儀基本原理    一、實驗目的  1. 了解高效液相色譜法分離的基本原理； 2. 了解高效液相色譜儀的基本構造； 3. 了解高效液相色譜儀的基本操作。 

二、基本原理  高效液相色譜（HPLC）法是以高壓下的液體為流動相，并采用顆粒極細的高效固定相的柱色譜分離技術。高效液相色譜對樣品的適用性廣，不受分析對象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制，因而彌補了氣相色譜法的不足。

二手安捷倫1200液相色譜儀分析原理：  （一）高效液相色譜分析的流程：由泵將儲液瓶中的溶劑吸入色譜系統(tǒng)，然后輸出，經(jīng)流量與壓力測量之后，導入進樣器。被測物由進樣器注入，并隨流動相通過色譜柱，在柱上進行分離后進入檢測器，檢測信號由數(shù)據(jù)處理設備采集與處理，并記錄色譜圖。廢液流入廢液瓶。遇到復雜的混合物分離（極性范圍比較寬）還可用梯度控制器作梯度洗脫。 （二）高效液相色譜的分離過程：同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動相之間進行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。

開始樣品加在柱頭上，假設樣品中含有３個組分，Ａ、Ｂ和Ｃ，隨流動相一起進入色譜柱，開始在固定相和流動相之間進行分配。分配系數(shù)小的組分Ａ不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分Ｃ在固定相上滯留時間長，較晚流出色譜柱。組分Ｂ的分配系數(shù)介于Ａ，Ｃ之間，第二個流出色譜柱。若一個含有多個組分的混合物進入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱，達到分離之目的。

不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù)、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學平衡問題，也是分離的首要條件。其次，當不同組分在色譜柱中運動時，譜帶隨柱長展寬，分離情況與兩相之間的擴散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動相的流速等有關。所以分離終效果則是熱力學與動力學兩方面的綜合效益。

 三、系統(tǒng)構成  1.主機：Waters Allance 2695高效液相色譜儀,分為①分離單元Allance2695；②紫外－可見檢測器2487；③熒光檢測器2474；④示差折光檢測器2414。 2.操作控制系統(tǒng)：DELL Dimmsen 4550微機；Waters Millunnium32 V4.0 色譜管理器軟件。