改良Lowry法蛋白定量試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：T15269

產(chǎn)品規(guī)格：500T/10000T

產(chǎn)品簡介：

目前常用的蛋白濃度檢測(cè)方法是：BCA蛋白定量試劑盒(BCA Protein Assay Kit)和Bradford蛋白定量試劑盒(Bradford Protein Assay Kit)。

尚寶生物改良Lowry法蛋白定量試劑盒是利用蛋白中肽鍵與銅離子結(jié)合成四配位基銅離子復(fù)合物，后者與Folin試劑(福林酚)反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色比色物，用分光光度法(酶標(biāo)儀或分光光度計(jì))檢測(cè)750nm處吸光度，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，求得待測(cè)蛋白樣品的濃度，在1～1500μg/ml濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)

2. 96孔板或離心管

操作步驟（僅供參考）：

1. 取1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)(20mg)中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。

2. 取適量20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)，稀釋至終濃度為1500μg/ml或所需濃度。如取75μl 20mg/ml 蛋白標(biāo)準(zhǔn)，加入925μl稀釋液，充分混勻，即配制1500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)。

特別提示：待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中。例如待測(cè)蛋白溶解于蔗糖中，亦取20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶解于蔗糖中。一般也可以用0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液。稀釋后的1500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)-20℃長期保存。

3. 根據(jù)樣品數(shù)量，按Folin-Ciocalteu Reagent:ddH 2 O =1：1的比例配制 Folin-Ciocalteu工作液，充分混勻。

4. 根據(jù)樣品數(shù)量，按試劑(B1):試劑(B2):試劑(B3)=50:1:1 的比例配制改良Lowry Reagent工作液，充分混勻。例如取 10ml Lowry A、0.2ml Lowry B、0.2ml Lowry C，配制成10.4ml改良Lowry Reagent工作液。

5. 將1500μg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)用稀釋待測(cè)樣品的溶液5倍梯度稀釋，濃度分別為 300μg/ml、60μg/ml、12μg/ml、2.4μg/ml、0μg/ml，各取40μl加到96孔板的標(biāo)準(zhǔn)品孔。

6. 加40μl待測(cè)蛋白樣品或稀釋液(空白對(duì)照)到96孔板的樣品孔中，如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測(cè)蛋白樣本的溶液不同，應(yīng)在待測(cè)蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液；如果標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液與溶解待測(cè)蛋白樣本的溶液相同，無需在待測(cè)蛋白樣本孔中加入40μl稀釋液。

7. 用多通道微量移液器快速將200μl配置好的改良Lowry Reagent工作液加入至各孔，立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動(dòng)輕輕混勻30s。室溫準(zhǔn)確孵育10min。

8. 用多通道微量移液器快速將20μl新鮮配置的Folin-Ciocalteu工作液加至上述各孔中，立即在96孔板混勻器上混勻30s或手動(dòng)輕輕混勻30s。加蓋以防止液體揮發(fā)，室溫準(zhǔn)確孵育30min

9. 輕輕混勻96孔板，酶標(biāo)儀或微量滴定板讀數(shù)儀測(cè)定750nm處吸光度，也可用分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積，檢測(cè)樣品數(shù)量亦相應(yīng)減少。對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得相應(yīng)待測(cè)樣品的蛋白濃度。同時(shí)建議所以樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品)采用三復(fù)孔，求平均值。

注意事項(xiàng)：

1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液后，即獲得蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液，該原液中含有防腐劑，不影響后續(xù)檢測(cè)，該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃長期保存。

2. 待測(cè)蛋白溶解于什么樣的稀釋液中，蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中，否者待測(cè)蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致，有可能導(dǎo)致測(cè)定不準(zhǔn)確。

3. 如果沒有酶標(biāo)儀，也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)考慮根據(jù)比色皿的最小檢測(cè)體積。應(yīng)按比例適當(dāng)加大改良Lowry Reagent工作液的用量使總體積不小于最小檢測(cè)體積，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的用量亦相應(yīng)按比例放大。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí)，每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品數(shù)量可能會(huì)顯著減少。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：6個(gè)月有效。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存。