百奧思科黃曲霉毒素B1免疫親和柱操作說明書
 

　　【概要】
 

　　黃曲霉毒素(AFT)是一類化學結(jié)構(gòu)類似的化合物，均為二氫呋喃香豆素的衍生物。黃曲霉毒素是主要由黃曲霉 (aspergillus flavus)寄生曲霉 (a.parasiticus)產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，在濕熱地區(qū)食品和飼料中出現(xiàn)黃曲霉毒素的機率最高。黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機構(gòu)劃定為1類致癌物，是一種毒性*的劇毒物質(zhì).黃曲霉毒素的危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴重時可導致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B1最為多見，其毒性和致癌性也*。B1是最危險的致癌物，經(jīng)常在玉米，花生，棉花種子，一些干果中常能檢測到。它們在紫外線照射下能產(chǎn)生熒光，根據(jù)熒光顏色不同，將其分為B族和G族兩大類及其衍生物。AFT已發(fā)現(xiàn)20余種。AFT主要污染糧油食品、動植物食品等；如花生、玉米，大米、小麥、豆類、堅果類、肉類、乳及乳制品、水產(chǎn)品等均有黃曲霉毒素污染。世界各國對食品，飼料中的黃曲霉毒素都有嚴格的*。
 

　　【適用范圍及性能】
 

　　本公司真菌毒素免疫柱系列產(chǎn)品測試形式是一個高性能的免疫親和柱，設計用于在進行 HPLC(高效液相色譜法)、GC-MS(氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián) 用 儀)、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附劑測定)之前清理(凈化)或 濃縮樣本。
 

　　用于定性、定量檢測谷物、副食品、酒類等食品和飼料等樣本中的黃曲霉毒素B1時的樣品前處理。
 

　　柱容量：≥200ng
 

　　回收率：≥90%
 

　　3mL柱管/支
 

　　【試驗原理】
 

　　本產(chǎn)品的測定的基礎是抗原抗體反應，黃曲霉毒素B1單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的黃曲霉毒素B1經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過黃曲霉毒素B1免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)，毒素與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫黃曲霉毒素B1，最后進行相關分析。
 

　　【包裝組成】
 

　　黃曲霉毒素B1標準品(選配)
 

　　25支/盒，3mL柱管/支
 

　　產(chǎn)品說明書1份
 

　　【需要而未提供的設備及試劑】
 

　　設備：
 

　　----高速均質(zhì)器或組織勻漿機
 

　　----粉碎機
 

　　----200ml/50ml量筒
 

　　----天平：感量0.1g
 

　　----微量移液器：單道 100ml～1000ml
 

　　----槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)
 

　　----玻璃微纖維濾紙(1.5mm孔徑)
 

　　----50ml漏斗
 

　　----一次性玻璃試管
 

　　----泵流操作架(包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等)
 

　　試劑：
 

　　----甲醇(色譜級)
 

　　----蒸餾水或去離子水
 

　　----pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(PBS)：稱取8.0g氯化鈉，1.2g磷酸氫二鈉，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，用990mL純水溶解，然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，最后用純水稀釋至1000mL
 

　　----吐溫-20/PBS溶液(0.1%)：取1mL吐溫-20，加入PBS緩沖溶液并定容至1000mL
 

　　【試劑配制】
 

　　樣品提取液：根據(jù)不同的樣品配置不同濃度的甲醇水溶液，作為樣品提取液。
 

　　【樣本處理步驟】
 

　　(一)花生，玉米，大米，小麥及其制品，植物油脂和飼料
 

　　----取25g粉碎的樣品(植物油脂直接取樣，無需處理)與125mL甲醇-水(7：3)溶液混合；
 

　　----加入5.0g氯化鈉以均質(zhì)器高速攪拌，提取2分鐘；
 

　　----4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；
 

　　----取15mL濾液并加入30mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾，取稀釋后液體待測；
 

　　----將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準確移取15.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；
 

　　----將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
 

　　----以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；
 

　　----準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
 

　　(二)醬油
 

　　----取50g試樣與100mL甲醇-水(8：2)溶液混合；
 

　　----加入2.5g氯化鈉以均質(zhì)器高速攪拌，提取1分鐘；
 

　　----4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；
 

　　----取10mL濾液并加入40mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾
 

　　----取稀釋后液體待測；
 

　　----將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；
 

　　----將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
 

　　----用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；
 

　　----準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
 

　　(三)食醋
 

　　----取5g試樣，加入1.0g氯化鈉；
 

　　----以pH7.0磷酸鹽緩沖溶液稀釋定容至25.0mL；
 

　　----4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；
 

　　----取10mL濾液并加入10mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾
 

　　----取稀釋后液體待測。
 

　　----將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；
 

　　----將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；
 

　　----用10.0mL 0.1%的吐溫/PBS清洗，再以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；
 

　　----準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。
 

　　【結(jié)果判定】
 

　　經(jīng)免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測，也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進行檢測。收集到的1mL洗脫液中的黃曲霉毒素B1含量相當于1g樣品中黃曲霉毒素B1含量。
 

　　【注意事項】
 

　　----黃曲霉毒素危害極大，應戴手套操作。
 

　　----使用過的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液最好用5%濃度次氯酸鈉溶液浸泡過夜。
 

　　----不要使用過了有效日期的免疫親和柱。
 

　　【貯藏條件及保存期】
 

　　貯藏條件：親和柱2-8℃常溫保存，不可凍存
 

　　保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。
 

　　【參考標準】
 

　　GB/T 18979-2003